[发明专利]一种体外辅助诊断胰腺癌的试剂盒

说明书

本发明属于生物诊断检测领域，涉及一种体外辅助诊断胰腺癌的试剂盒。人血清miR‐25作为检测靶标可在制备胰腺癌诊断试剂中应用。一种用于体外辅助诊断胰腺癌的试剂盒，包含人血清miR‐25的逆转录引物、实时荧光定量PCR检测人血清miR‐25的引物和探针。本发明通过大量实验研究发现人血清中的miR‐25与胰腺癌发生具有相关性，基于此发现提出了血清miR‐25可以作为一个新的胰腺癌检测靶标，在制备胰腺癌诊断试剂中应用。进而通过设计miR‐25的逆转录体系、以及定性/或定量检测体系，制备得到一种用于体外辅助诊断胰腺癌的试剂盒，该试剂盒具有良好的敏感度和特异度。

技术领域

本发明属于生物诊断检测领域，涉及一种体外辅助诊断胰腺癌的试剂盒。

背景技术

胰腺癌（pancreatic carcinoma）主要指胰外分泌腺腺癌，是胰腺恶性肿瘤中最常见的一种，占常见肿瘤的1%-2%，占消化道肿瘤的8%-10%。全球胰腺癌发病率约为9/10万，死亡率也接近9/10万。据美国临床肿瘤协会的统计，2005年，全美胰腺癌新发病例为32180例，病死数为31800例，在恶性肿瘤死亡率中居第四位。在胰腺癌的发病率和死亡率上，我国的情况与美国相似，目前，我国胰腺癌发病率估计为10/10万，且有逐年增加的趋势，患者的总体生存率为0.5%～1%。

由于胰腺癌早期症状隐匿，故早期诊断十分困难，当出现典型症状时多已属晚期，治疗效果也不理想，病死率很高，5年生存率仅为4%，因此胰腺癌是恶性程度高，进展迅速、严重危害人类健康的肿瘤之一。

目前，胰腺癌的诊断方法包括内镜、影像学检查和肿瘤标志物检测。内镜及影像学检查方法包括B超检查、电子计算机X线断层扫描(CT)、磁共振(MRI)、磁共振胰胆管成像(MRCP)、正电子发射断层扫描(PET)、正电子发射断层扫描(PET)以及超声内镜检查(EUS)、经口胰管镜(POPS)、胰管内超声检查(PIDUS)等。但由于胰腺位置隐匿，内镜及影像学技术的诊断效果有限。目前，用于胰腺癌诊断和随访的肿瘤标记物有10余种，但迄今为止尚未找到一种对胰腺癌诊断灵敏性和特异性都十分满意的肿瘤标志物。因此各指标单独使用对胰腺癌早期诊断价值不大，可用于判断胰腺癌切除后是否有残余病灶以及复发的监测。常用的肿瘤标志物包括CA19-9、CEA（癌胚抗原）。但是，上述肿瘤标记物的灵敏度和特异性相对较低，它们的检测结果还不能作为胰腺癌确诊的指标。胰腺癌的早期诊断率是提高胰腺癌病人生存率最关键的因素，然而上述任何一种肿瘤标记物还难以满足胰腺癌早期诊断的这种需求。一些传统医学手段，如组织细胞检测存在着其固有的缺陷，取材位置不当、组织细胞标本材料不足或人为经验不足等都将导致误诊。同时，某些有创的检测方法如逆行胰胆管造影（ERCP）甚至可以造成出血、继发胰腺炎、胆汁漏、休克等严重并发症。影像学虽然已被广泛应用于癌症的检查和诊断，但其在疾病程度的定性上仍存在着很大的局限性。因此，目前非常有必要寻找能够弥补现有诊断方法的新型、灵敏并且应用方便的疾病检测标记物。

MicroRNA为一类长约19-23个核苷酸的单链小核糖核酸（RNA）分子，位于基因组非编码区，进化上高度保守，可以通过抑制靶基因的翻译（Translation）过程对基因表达进行调节。微小核糖核酸参与正常生理活动，如生物个体发育、组织分化、细胞凋亡以及能量代谢等，也与许多疾病的发生及发展存在着紧密的联系。发明人率先发现血清中microRNA在各种环境中表达非常稳定，并且与多种疾病的发生、发展具有极强的相关性；再加上其取材便利，使得血清microRNA具备了成为优异生物标志物的潜质，具有良好的开发应用前景。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种新的胰腺癌血清标记物人血清miR-25作为检测靶标在制备胰腺癌诊断试剂中的应用。

本发明的另一目的是提供定性或定量检测人血清miR-25的引物和/或探针在制备胰腺癌诊断试剂中的应用。

本发明的又一目的是提供一种体外辅助诊断胰腺癌的试剂盒。