[发明专利]一种耐酸铝的细菌菌株

说明书

技术领域：

本发明涉及微生物领域的细菌，具体地说是一种耐酸铝的细菌菌株。 

背景技术：

铝是生物正常生长的非必需元素，在微酸性和中性土壤中，铝主要以三价氧化态和稳定的矿物质形式存在，表现出极低的生物有效性。但是，随着土壤pH的降低，铝可逐渐解离，以离子态释放到土壤溶液中，成为有活性的单体形式(monomeric Al)，对土壤生物存在非常大的毒害作用。近年来，随着酸性沉降和化学肥料的大量使用，酸性红壤中活性铝浓度呈持续升高趋势，已严重影响到农作物的生长。这种污染现状，已引起了学术界广泛的关注。 

如何降低土壤中铝的毒害，提高农作物的产量、减少其对其他环境的危害，一直是红壤区域综合治理与生态恢复技术研究中的一个重要课题。传统上，人们常用石灰和肥料等对土壤进行改良，旨在为作物生长创造适宜的土壤条件。施用石灰和肥料虽能减轻或防治表土的酸铝所产生的作物生长障碍问题，但对于深底层土壤施用石灰或肥料既有困难也不经济，而且这些措施需要投入大量的人力、物力和财力，且不能一劳永逸，难以取得良好的经济效益和生态效益。 

近年来，随着一些耐铝微生物的发现，将驯化时间短、铝离子吸附快、环境适应性强的微生物用于红壤铝毒的改良已日益受到人们的关注。 

发明内容：

本发明要解决的技术问题是，寻找分离出一种耐酸铝的微生物细菌菌株。 

本发明的技术解决方案是，在红壤土中分离出一种耐酸铝的细菌菌株，该菌株属于β变形杆菌亚门(β-proteobacteria)伯克氏菌属(Burkholderia sp.)，命名为Burkholderia sp.SB1，并于2013年9月保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为：CGMCC No.8396。 

该菌株的生物学特性为：革兰氏阴性，最适宜在pH值为5.0，温度为37℃环境下生长；有较强的耐酸性；具有对氨苄青霉素、四环素以及硫链霉素的联合抗性。该菌在生长初期，高浓度铝会影响细菌的生长，但在其生长中后期表现出很强的耐铝能力，明显表现出对铝的吸附特性。 

本发明所涉及的耐酸铝的细菌菌株是通过以下方法分离筛选得到的： 

(1)在江西省吉安市境内采集的新鲜红壤土样本，在样本内取5g鲜土加入10mL无菌水配成土壤溶液；取1mL土壤溶液于99mL灭菌GM液体培养基中，并在培养基中添加50μL 1mol/L无菌AlCl₃·6H₂O溶液、放置温度37℃，振动频率为260rpm/min振荡培养箱中培养15h。 

(2)取步骤(1)中获得的菌液1mL，加到装有灭菌的99mL液体GM培养基的250mL锥形瓶中，培养基中外加100uL 1mol/L AlCl₃·6H₂O溶液，放置温度为37℃，振动频率为260r/min振荡培养箱中培养15h。 

(3)取步骤(2)中获得的菌液5份，每份各1mL，分别加到装有灭菌的99ml液体GM培养基的250mL锥形瓶中，每份培养基中外加铝浓度分别为2mmol/L、4mmol/L、6mmol/L、8mmol/L、10mmol/L AlCl₃·6H₂O溶液，并依次编号为1-5号样本，放置温度37℃，振动频率为260rpm/min振荡培养箱中培养15h。 

(4)对步骤(3)中的获得的5份富集菌液，各取出1mL建立5份菌液样本，并分别对这5份菌液进行梯度稀释，稀释梯度依次为原液、10^-1、10^-2、10^-3、10^-4；并相应编号为1-5号样本，对稀释后的5份菌液，各取0.1mL所得的稀释液分别涂布于含有与步骤(3)相对应的铝浓度的GM固体培养基平板上，在温度为37℃环境下培养2d。结果在涂布在GM固体培养基平板上的3-5号样本没有发现单菌落，而在1-2号样本中分离筛选出本发明Burkholderia sp.SB1。 

(5)用已灭菌的移液枪头从2号样本中挑取8个较大而且独立的菌落，分别划线于8个含铝浓度为4mmol/L AlCl₃·6H₂O的平板上，在温度37℃环境下培养2d。将纯化后的单菌于含4mmol/L Al³⁺浓度培养基中扩大培养。获得菌液部分保种于-80℃冰箱内，部分保存于4℃冰箱内用于后续实验。