[发明专利]一种高效生产γ‑聚谷氨酸的方法

权利要求书

1.一种高效生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于：以地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）CGMCC NO.3336为出发菌株，通过液体深层发酵制备，包括如下步骤：

（1）菌种活化：将地衣芽孢杆菌CGMCC NO.3336原始菌株接种在斜面培养基上，于37℃培养16小时，如此活化2-3次，制备成熟的斜面种子；

所述斜面培养基组成为：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl10g/L，琼脂20g/L，pH7.2，不足部分纯净水补足；

（2）种子液的制备：将一环活化后的斜面种子接种于装有50ml液体培养基的500ml三角瓶中，37℃，220rpm培养16小时至对数生长期；

所述种子培养基组成为：葡萄糖30g/L，酵母膏7g/L，胰蛋白胨10g/L，K₂HPO₄0.5g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，pH7.2，不足部分纯净水补足；

（3）发酵罐发酵：将步骤（2）中的种子液以10%的接种量接种于发酵罐，30L发酵罐发酵培养基装液量为15L，初始发酵温度37℃，罐压0.01-0.05Mpa，通风量0.5-1.0vvm，转速400-600rpm；当发酵至24h后调节转速至200-400rpm，通风量1.0-1.5vvm，并开始补加流加培养基，通过pH值的反馈调节流加培养基的流加速度，控制pH值在7.4-7.9至发酵结束前2-6小时,总发酵时间为72h；

所述发酵培养基组成为：葡萄糖80g/L，酵母膏20g/L，NH₄NO₃4.5g/L，MgSO₄·6H₂O0.5g/L，NaCl10g/L，CaCl₂·6H₂O0.5g/L，FeSO₄0.01g/L,谷氨酸钠40g/L,NaNO₃20-40g/L,MnSO₄·H₂O0.15g/L,pH值7.2-7.5,不足部分纯净水补足；

所述流加培养基组成为：葡萄糖650-850g/L，NaCl30.0-60.0g/L，CaCl₂·6H₂O10-15.0g/L，MnSO₄·H₂O5-10g/L，MgSO₄·6H₂O5-20g/L，pH值7.4-7.9,不足部分纯净水补足。

2.如权利要求1所述的一种高效生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于：所述发酵培养基组成为：葡萄糖80g/L，酵母膏20g/L，NH₄NO₃4.5g/L，MgSO₄·6H₂O0.5g/L，NaCl10g/L，CaCl₂·6H₂O0.5g/L，FeSO₄0.01g/L,谷氨酸钠40g/L,NaNO₃30g/L，MnSO₄·H₂O0.15g/L,pH值7.2,不足部分纯净水补足。

3.如权利要求1所述的一种高效生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于：所述发酵培养基组成为：葡萄糖80g/L，酵母膏20g/L，NH₄NO₃4.5g/L，MgSO₄·6H₂O0.5g/L，NaCl10g/L，CaCl₂·6H₂O0.5g/L，FeSO₄0.01g/L,谷氨酸钠40g/L,NaNO₃20g/L,MnSO₄·H₂O0.15g/L,pH值7.4,不足部分纯净水补足。

4.如权利要求1所述的一种高效生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于：所述发酵培养基组成为：葡萄糖80g/L，酵母膏20g/L，NH₄NO₃4.5g/L，MgSO₄·6H₂O0.5g/L，NaCl10g/L，CaCl₂·6H₂O0.5g/L，FeSO₄0.01g/L,谷氨酸钠40g/L,NaNO₃40g/L,MnSO₄·H₂O0.15g/L,pH值7.5,不足部分纯净水补足。