[发明专利]一种优化的生产昆虫病原线虫的固体培养基

说明书

技术领域

本发明涉及优化固体培养方法，提高昆虫病原线虫产量的方法。 

背景技术

据世界卫生组织和联合国环境署报告，全世界每年有100多万人农药中毒，其中2万人死亡。美国每年发生6.7万起农药中毒事故，在发展中国家情况更为严重。 

我国蔬菜农药污染已经成为一个国民强烈关注的民生问题，尤其是我国韭菜上农药检出率和超标率都在30％以上，屡有农药中毒事故发生，食品安全问题十分令人担忧。众所周知，长期高频次使用化学农药的大量使用会加速使昆虫产生抗药性，结果反而造成农户只能过量使用或使用高毒性的农药，从而陷入防治害虫的恶性循环。 

昆虫病原线虫是昆虫的天敌，其作为一种理想的生物杀虫剂，具有以下优点：专性寄生，寄主范围广；对寄主昆虫具有主动搜寻能力；能够从寄主昆虫的自然开口(如口器、气门和肛门)、伤口或节间膜进入寄主昆虫体内，并且能够迅速杀死寄主昆虫；能够在人工培养基低成本大量培养；田间施用时可和多种化学农药混合使用，对人畜、植物及有益生物及环境安全。由于昆虫病原线虫属于环境友好型的生物天敌，欧美一些国家已经豁免注册生产和生产销售，并已经广泛应用于地下害虫甚至地上害虫的防治之中。 

目前昆虫病原线虫的施用方法主要为将通过固体或液体培养出来的线虫悬液喷洒到农作物或果树上。固体基质培养法能够生产昆虫病原线虫，八十年代初，Bedding和Wouts将海绵作填充剂分别加人鸡内脏或其他动物内脏物质以及加大豆粉、酵母膏、玉米油等，实现了线虫的固体基质培养，大大的提高了昆虫病原线虫产量，使线虫制剂生产规模由小到大。同时，以海绵做为线虫培养的充填剂，使线虫的固体培养走向了工厂化。固体培养基法生产昆虫病原线虫，需要投资规模小，需要劳动力较多，属于劳动密集型技术，比较适合我国当前的国情。但是，固体培养基法培养线虫时，生产过程需要无菌，需要稳定的产量，进而才能降低成本，提高昆虫病原线虫的竞争力，在更大范围和面积上替代化学农药防治有害昆虫。 

如何对现有的配方进行改进，提高固体法生产昆虫病原线虫，对完善和进一步推广固体法生产昆虫病原线虫技术，具有非常现实的研究和应用意义。 

发明内容

昆虫病原线虫固体培养基包括碳源、氮源等营养成分，主要包括豆粉、面粉、鸡蛋黄粉、橄榄油、酵母提取物、海绵和水。本发明的目的是优化培养基，得到产量相对稳定的昆虫病原线虫固体培养基配方。通过优化的培养基我们得到了昆虫病原线虫产量22万-32万条线虫/克培养基，而且该配方在培养期间，没有染菌现象。本发明中优化的固体培养基，是一种能够稳定生产昆虫病原线虫固体培养基。将降低培养过程中杂菌感染的风险，效果稳定。 

本发明利用优化的固体培养基生产昆虫病原线虫。本发明所述的线虫为昆虫病原线虫。 

本发明中优化的生产昆虫病原线虫的固体培养为： 

优化的固体培养基配方：每12克培养基中包括豆粉(1.79克)，面粉(0.31克)，鸡蛋黄 粉(0.1克)，橄榄油(0.3克)、酵母提取物(0.2克)，海绵(1.0克)和水(8.3克)。 

实施例1.12克优化的昆虫病原线虫固体培养基 

用豆粉(1.79克)，面粉(0.31克)，鸡蛋黄粉(01克)，橄榄油(0.3克)、酵母提取物(0.2克)，海绵(1.0克)和水(8.3克)混合配置得到12克克体培养基。 

实施例2.36克优化的昆虫病原线虫固体培养基 

用豆粉(5.37克)，面粉(0.93克)，鸡蛋黄粉(0.3克)，橄榄油(0.9克)、酵母提取物(0.6克)，海绵(3.0克)和水(24.9克)混合配置得到了36克固体培养基。 

实施例3.应用优化的固体培养基增加昆虫病原线虫的产量 

按照实施例1所述，配置12克优化的固体培养基，并依照传统无菌培养步骤培养昆虫病原线虫，增产效果明显，产量达30万条/克培养基，比对照增加了37％(表1)。对照培养基采用文献报导方法配置(王丽芳等2010)。 

表1、优化的固体培养基配方增加昆虫病原线虫产量的效果(单位：条/克培养基) 

按照实施例2所述，配置36克优化的固体培养基，依照传统无菌培养步骤培养昆虫病原线虫，优化培养基的产量约为23.7万条/克培养基，比对照(12.7万条/克培养基)增加了46％。对照组出现杂菌，而优化培养基组产量稳定，具有很好的增产效果(表2)。对照培养基采用文献报导方法配置(王丽芳等2010)。可见优化的培养基能够稳定的生产昆虫病原线虫，有利于利用固体培养基法的工业化生产昆虫病原线虫。