[发明专利]一种快速测定细胞的放射性结合能力的方法

说明书

技术领域

本发明属于核医学及动物实验技术领域，具体涉及一种快速测定细胞与放射性药物的结合能力的方法。

背景技术

在新药研发及药物代谢研究中，细胞实验在整个动物实验中起到了举足轻重的作用，体外细胞实验是体内给药的指导，有效、客观的细胞实验数据尤为重要。由于体外细胞没有抗感染能力，实验者在进行操作时的粗心大意或不规范操作都会对细胞造成影响，因此减少细胞实验的操作步骤可有效的避免细胞污染。

体外细胞放射性摄取实验的目的是考察细胞与放射性药物的结合能力。现有技术中常规的测定方法是通过γ计数仪检测放射性计数CPM得到某一放射性药物与细胞结合的情况，并计算细胞结合率（%）进而考察细胞与该放射性药物的结合能力。以¹⁸F-FDG与细胞的体外实验为例，测定其细胞结合率具体步骤包括：取一定密度的细胞进行铺板，并设一组空白对照组，于37℃，5%CO₂，二氧化碳培养箱中培养24h后，加¹⁸F-FDG（10μCi/mL），于37℃，5%CO2，二氧化碳培养箱孵育60min，吸去上清液，加生理盐水200μl洗2次，存于放免管中记为上清液管（F），随后向余下的细胞中加胰酶消化（由于细胞贴壁生长，不方便细胞的转移），然后将细胞转移到放免管中，用200μl生理盐水洗2次同时加入放免管中，记为细胞摄取管（B），由Wizardγ计数仪分别检测上清液管（F）和细胞摄取管（B）的放射性计数CPM，按照公式B/(B+F)×100%来计算¹⁸F-FDG的细胞结合率（%），考察了细胞与放射性药物的结合能力。

然而上述方法仍然存在诸多不足，首先，该方法中存在将细胞或吸取的上清液转移到放免管中的步骤，受人为操作因素影响，进而增大了由于人员进行操作时的粗心大意或不规范操作可能对细胞造成污染等不利影响的机会；其次，为了便于细胞转移到放免管中，在该方法中还需要添加胰酶消化，使细胞脱离孔板，但是由于胰酶消化需要反应一段时间才能使贴壁生长的细胞脱离孔板，因此其比较耗时，效率较低；最后，由于该方法中存在人为的操作即将细胞或吸取的上清液转移到放免管中、添加胰酶消化便于细胞脱离孔板以及吸取上清液或细胞转移后加生理盐水清洗等步骤使得该方法步骤过多，操作起来较复杂，不方便。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于现有技术中用于评价细胞的放射性结合能力的方法存在操作复杂、耗时、极易引起误差等问题，进而提供一种操作步骤简单、客观可靠的快速测定细胞与放射性药物的结合能力的方法。

为解决上述技术问题，本发明的快速测定细胞与放射性药物的结合能力的方法，包括

（1）取采用常规培养液按照常规方法进行培养的待测定细胞进行铺孔板操作，并将铺孔板后的细胞连同孔板进行常规孵育培养，备用；

（2）向所述步骤（1）处理后的细胞中加入放射性标记物，并进行常规孵育培养，随后对含有细胞及培养液的孔板进行PET扫描，得到总放射性摄取值，记为PETUnit_总；

（3）除去所述孔板中的培养液，以生理盐水对待测定细胞进行洗涤并除去生理盐水，随后对仅含有细胞的孔板进行PET扫描，得到细胞的放射性摄取值，记为PETUnit；

（4）另取相同孔板，并按照步骤（1）和步骤（2）中的添加量先后加入所述培养液和放射性标记物，进行相同条件的孵育培养，随后除去所述培养液，以生理盐水洗涤所述孔板并除去生理盐水，并对洗涤处理后的所述孔板进行PET扫描，得到所述孔板的放射性摄取值，记为PETUnit_空白；

（5）按照公式PETUnit-PETUnit_空白/PETUnit_总*100%计算得到待测定细胞的放射性结合率，用以评价所述细胞的放射性结合能力。

所述的放射性标记物包括¹⁸F-FDG、¹⁸F-FLT或¹¹C-胆碱。

所述的放射性标记物的浓度为8-12μCi/mL，优选的为10μCi/mL。

优选的，所述待测定细胞的浓度为7.0-9.0*10⁴个/mL。

所述待测定细胞铺孔板时每孔190-210μL。

所述生理盐水的浓度为0.8-1.0%。

所述步骤（1）中，所述常规孵育培养的步骤，培养条件为35-40℃，3-8%CO₂的二氧化碳培养箱中孵育培养22-24h。