[发明专利]一种铜绿假单胞菌MSHA菌毛株肿瘤疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤主动特异性免疫治疗（active specific immunotherapy，ASI）领域，主要涉及一种以铜绿假单胞菌MSHA菌毛株为佐剂的肿瘤疫苗及其制备方法。

背景技术

肿瘤细胞具有多种肿瘤特异性抗原(tumor specific antigen，TSA)和肿瘤相关抗原(tumor associated antigen，TAA)，因此可以利用肿瘤细胞作为肿瘤抗原制成肿瘤疫苗，免疫人体后能够诱导抗肿瘤免疫反应，从而达到治疗肿瘤的目的。虽然肿瘤疫苗的开发已经有几十年的历史，但肿瘤疫苗的免疫效果并不令人满意，因此人们采用各种技术来增强肿瘤疫苗的免疫原性，包括近年来出现的转染了各种基因的肿瘤细胞。

最直接的肿瘤疫苗制备方法，就是将肿瘤细胞加工处理后，加上免疫佐剂来免疫患者。其中，免疫佐剂能够增加肿瘤抗原的免疫原性，从而增强肿瘤疫苗诱导的抗肿瘤免疫反应，而免疫佐剂的选择就成为肿瘤疫苗研制的关键因素之一。可用于肿瘤疫苗的免疫佐剂很多，包括脂质体、微生物及其抽提成分等。为了达到最佳的免疫效果，针对不同来源和种类的免疫佐剂，必然需要与肿瘤抗原进行不同的药物组合。

因此，本领域迫切需要提供新的肿瘤疫苗佐剂，以及相应佐剂与肿瘤抗原的合适比例。

发明内容

本发明旨在提供一种新的肿瘤疫苗及其制备方法。

在本发明的第一方面，提供了一种组合物，所述组合物包括肿瘤抗原和铜绿假单胞菌MSHA菌毛株。

在另一优选例中，所述组合物包括肺癌肿瘤抗原和铜绿假单胞菌MSHA菌毛株，并且10μg肺癌肿瘤抗原：1×10⁷－9×10⁸个铜绿假单胞菌MSHA菌毛株；更佳地，所述组合物中是10μg肺癌肿瘤抗原：1×10⁷－5×10⁸个铜绿假单胞菌MSHA菌毛株；最佳地，所述组合物中是10μg肺癌肿瘤抗原：1×10⁷－1×10⁸个铜绿假单胞菌MSHA菌毛株。

在另一优选例中，所述肿瘤抗原来自肿瘤细胞的裂解产物，所述铜绿假单胞菌MSHA菌毛株已完全灭活。

在本发明的第二方面，提供了一种如上所述的本发明提供的组合物的制备方法，所述的方法包括步骤：将肿瘤抗原和铜绿假单胞菌MSHA菌毛株直接混合。

在本发明的第三方面，提供了一种如上所述的本发明提供的组合物的用途，用于制备治疗或预防癌症的肿瘤疫苗。

在另一优选例中，所述的癌症选自肺癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、胆管癌、胰腺癌、乳腺癌、甲状腺癌、鼻咽癌、肾癌、膀胱癌、宫颈癌、卵巢癌、神经胶质瘤、血液系统肿瘤；更佳地，所述的癌症是肺癌。

在本发明的第四方面，提供了一种铜绿假单胞菌MSHA菌毛株的用途，用作肿瘤疫苗的佐剂。

据此，本发明提供了新的肿瘤疫苗佐剂，以及相应佐剂与肿瘤抗原的合适比例。

附图说明

图1显示了不同剂量肿瘤抗原对肿瘤生长的影响。

图2显示了不同剂量铜绿假单胞菌MSHA菌毛株对肿瘤生长的影响。

图3显示了不同剂量组合的肿瘤疫苗对于肿瘤生长的影响。

图4显示了不同剂量组合的肿瘤疫苗对于生存率的影响。

具体实施方式

发明人经过广泛而深入的研究，发现了一种全新的肿瘤疫苗佐剂，即铜绿假单胞菌MSHA菌毛株，并且在该发现的基础上提供了一种新的肿瘤疫苗。

如本文所用，“肿瘤疫苗”是指带有肿瘤抗原的物质，可用于治疗和/或预防肿瘤。

如本文所用，“肿瘤抗原”是来自肿瘤细胞的裂解产物。由于肿瘤细胞的裂解产物中，包含肿瘤的绝大部分可溶性成分，因此其中既有肿瘤特异性抗原(tumor specific antigen，TSA)，也有肿瘤相关性抗原(tumor associated antigen，TAA)。在本发明的一个实施例中，使用小鼠肺癌3LL细胞制备肿瘤抗原。

如本文所用，“佐剂（adjuvant）”或“疫苗佐剂”可以互换使用，都是指非特异性免疫增强剂，当与抗原一起注射或预先注入机体时，可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。

如本文所用，“铜绿假单胞菌MSHA菌毛株”在中国专利申请200510059850.X中有记载，即绿脓杆菌甘露糖敏感血凝菌毛株，相关内容在此并入本申请中。菌种保藏号为CGMCC0190。本发明中所用的铜绿假单胞菌MSHA菌毛株，预先经1%甲醛完全灭活。