[发明专利]一种鼠李糖乳杆菌的胞外多糖及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种鼠李糖乳杆菌的胞外多糖，其特征在于，所述胞外多糖由质量分数比为45.13～47.80%的葡萄糖、35.26～36.17%的鼠李糖和16.94～18.70%的半乳糖组成，该胞外多糖的平均重量分子量为980,543～1,470,237道尔顿。

2.如权利要求1所述的胞外多糖，其特征在于，所述的胞外多糖由保藏号为CGMCC NO.6430的鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)菌株所产生。

3.一种如权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌的胞外多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将保藏编号为CGMCC No.6430的鼠李糖乳杆菌的种子液以体积比1.0～5.0%的接种量接种于无菌脱脂乳培养基，于28～36℃培养24～40小时得发酵液；

（2）将步骤（1）所得的发酵液在95～100℃加热10～30min，冷却至15～25℃后静置3～16小时，离心取上清并向所述上清中加入三氯乙酸溶液至终浓度为5～8%，静置8～16小时，离心获得发酵上清液；所述百分比为每100毫升中含有的三氯乙酸的克数，所述三氯乙酸溶液是质量百分数为75～85%的三氯乙酸溶液；

（3）向步骤（2）所得的发酵上清液中加入2～4倍体积的体积百分数为80～100%的乙醇，离心或过滤收集沉淀物并将沉淀物溶于水，用截留分子量为5000～14000道尔顿的透析袋在水中透析48～72小时，每8～12小时换水一次，在温度不超过105℃下干燥或者真空冷冻干燥，即得所述胞外多糖的粗品。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的无菌脱脂乳培养基是将10～12重量份脱脂乳和0.8～1.2重量份葡萄糖溶解于85～90重量份的水中，于115～125℃灭菌15～20分钟，冷却至15～25℃所得的无菌脱脂乳培养基；所述的接种量是2.0～4.0%，发酵的时间是24～36小时。

5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的接种量是2.0～2.5%，发酵的时间是28～32小时。

6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的加热为将步骤（1）所得的发酵液在95～100℃加热15～20min；所述的三氯乙酸的质量百分数为78～82%。

7.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述的乙醇的体积百分数为82～90%；所述透析袋的截留分子量为12000～14000道尔顿。

8.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，其还包括步骤（4）：所述的步骤（4）为：采用离子交换层析柱对步骤（3）所得的胞外多糖的粗品进行分离纯化，依次以45～55mM，pH7.5～7.8的Tris-HCl缓冲液和含0.2～1.2M NaCl的45～55mM，pH7.5～7.8的Tris-HCl缓冲液进行线性梯度洗脱，洗脱速度为2.5～3.5mL/min，合并收集第二个组分峰的洗脱产物，装入截留分子量为10000～15000道尔顿的透析袋在去离子水透析中48～72小时，每8～12小时换水一次，在温度不超过105℃下干燥或者真空冷冻干燥，即得所述胞外多糖。

9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（4）为：采用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析柱对步骤（3）所得的胞外多糖的粗品进行分离纯化，所述离子交换层析柱的规格为D2.6cm×30cm，依次以50mM，pH7.6的Tris-HCl缓冲液和含0.5～1.0M NaCl的50mM，pH7.6的Tris-HCl缓冲液进行线性梯度洗脱，洗脱速度为3mL/min，合并收集第二个组分峰的洗脱产物，装入截留分子量为14000道尔顿的透析袋在去离子水透析中72小时，每8小时换水一次，在温度不超过105℃下干燥或者真空冷冻干燥，即得所述胞外多糖。

10.如权利要求1所述的胞外多糖在食品、医药和相关领域的应用。