[发明专利]一种新型等温环介导小肠结肠炎耶尔森菌核酸标记检测试剂

权利要求书

1.一种新型等温环介导小肠结肠炎耶尔森菌核酸标记检测试剂，其特征在于，所述的检测试剂包括小肠结肠炎耶尔森菌等温环介导核酸标记扩增反应液，该反应液中含有前外引物、后外引物、前促环引物、后促环引物、5’端标记生物素基团的前内引物、5’端标记异硫氰酸荧光素基团的后内引物、dNTPs溶液、具有链置换活性的DNA聚合酶（如：Bst DNA聚合酶）、MgSO₄、无菌双蒸水以及环介导等温扩增的缓冲液。

2.根据权利要求1所述的一种新型等温环介导小肠结肠炎耶尔森菌核酸标记检测试剂，其特征在于，使用的前外引物、后外引物、前促环引物、后促环引物、前内引物和后内引物的序列如下：

SEQ ID NO:1 5’-TTTACCGGGCGAGGATGGC-3’,

SEQ ID NO:2 5’-TGCGAGAGAGATCAATTTGAAAT-3’,

SEQ ID NO:3 5’-TCGCAGTGAGCACCAG-3’,

SEQ ID NO:4 5’-AGCGCGAATTCAGGCATT-3’,

SEQ ID NO:5 5’-CGCAACCTTATCTTGCCAATCATCAGACAA ACCTGCCA-3’,

SEQ ID NO:6 5’-CACCAAACCTTTTCATCTTATGCGAGGCCGATATTGC-3’。

3.根据权利要求1所述的一种新型等温环介导小肠结肠炎耶尔森菌核酸标记检测试剂，其特征在于，使用该试剂，能够在扩增目的基因的同时将扩增产物DNA上标记生物素基团和异硫氰酸荧光素基团。

4.根据权利要求1所述的一种新型等温环介导小肠结肠炎耶尔森菌核酸标记检测试剂，其特征在于，将提取得到的待测DNA溶液作为扩增模板加入到装有核酸恒温标记扩增反应液的PCR管中，在60～65℃下扩增反应30～60分钟，优选60℃下扩增反应60分钟。

5.一种新型等温环介导小肠结肠炎耶尔森菌核酸标记检测试剂所使用的胶体金检测试纸，其特征在于，胶体金检测试纸的金胶垫上含有标记后抗生物素抗体的金颗粒，胶体金检测试纸层析膜的检测线上包被有抗异硫氰酸生物素抗体，胶体金检测试纸层析膜的质控线上包被有能和金颗粒上标记的抗生物素抗体结合的二抗。

6.根据权利要求4所述的一种新型等温环介导小肠结肠炎耶尔森菌核酸标记检测试剂所使用的胶体金检测试纸，其特征在于，将待测标记扩增产物滴加在检测试纸的样品垫上，当检测线和质控线都呈现红色时表明DNA样品中含有小肠结肠炎耶尔森菌的待测基因，当检测线无色而质控线呈现红色表明DNA样品中不含有小肠结肠炎耶尔森菌的待测基因。