[发明专利]高效液相色谱法测定红曲中γ-氨基丁酸含量的方法

权利要求书

1.一种高效液相色谱法测定红曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于，其测定步骤为：（1）γ-氨基丁酸的提取：将称取的红曲样品加到水中，超声提取，离心分离收集上清液；

（2）醇沉：在上清液中加入乙醇和无机盐溶液进行醇沉处理，离心分离得到醇沉上清液；

（3）酶处理：醇沉上清液脱除溶剂，然后加入复合酶制剂进行酶处理；

（4）脱色素处理：将酶处理后的浓缩液上柱吸附，树脂吸附、氨水洗脱；洗脱液用微孔滤膜过滤，所得过滤液即为待检测液；

（5）所述待检测液经柱前衍生化处理，即可采用液相色谱法测定。

2.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定红曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，红曲样品加到10～30倍体积超纯水中，超声提取1～4h；所述提取和分离步骤重复2～5次，合并上清液。

3.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定红曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，上清液加入1～2倍体积的乙醇和1/5～1/10体积的5wt%～10wt%无机盐溶液，在-10℃～4℃静置处理10～30min。

4.根据权利要求3所述的高效液相色谱法测定红曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于：所述无机盐为醋酸钾、醋酸铵或硫酸铵。

5.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定红曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，复合酶制剂为蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶和果胶酶的混合物；酶处理温度为25～55℃，pH为3.5～9.0，静置处理30～60min。

6.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定红曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于：所述步骤（4）中，层析柱的柱床高为15～20cm，采用0.2～2mol/L的氨水洗脱。

7.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定红曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于：所述步骤（5）中，采用邻苯二甲醛和β-巯基乙醇为衍生化试剂进行柱前衍生。

8.根据权利要求7所述的高效液相色谱法测定红曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于：所述待检测液中加入1～8倍体积衍生化试剂，避光混合1～5min进行衍生，然后微孔滤膜过滤。

9.根据权利要求1－8任意一项所述的高效液相色谱法测定红曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于，所述步骤（5）中液相色谱法的测定步骤为：首先采用液相色谱检测一系列具有梯度浓度的γ-氨基丁酸标准溶液，绘制峰面积-浓度标准曲线；再将经柱前衍生化处理的检测液用液相色谱检测，根据峰面积-浓度标准曲线，即可得到红曲样品的γ-氨基丁酸含量。

10.根据权利要求9所述的高效液相色谱法测定红曲中γ-氨基丁酸含量的方法，其特征在于，所述液相色谱法的测定条件为：色谱柱为反相C18柱；检测波长为338nm；色谱柱温度为室温；流动相A和流动相B按比例混合均匀，其中流动相A所占比例为30～70%，使用前经微孔滤膜过滤，超声波脱气后使用；流动相流速为0.5～1.5mL/min；进样量10～20μl。