[发明专利]海南粗榧芽诱导培养基的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于海南粗榧的培养技术，更具体涉及海南粗榧芽诱导培养基的制备方法。

背景技术

海南粗榧为常绿乔木，是三尖杉属的一种孑遗植物。该植物为三尖杉属中分布最南的一个种，主要分布于东亚和中南半岛北部，主产我国海南省。海南粗榧含有11 种生物碱,是国内三尖属植物中生物碱种类最多的，含量也最高。但是，目前野生海南粗榧资源濒临灭绝，发展海南粗榧的培养处理方法是研究的热点。

发明内容

技术方案

本发明涉及一种海南粗榧的培养基的制备方法，其特征在于：所述方法的具体步骤包括：芽诱导培养基的制备方法。

     本发明涉及一种海南粗榧的芽诱导培养基的制备方法，其特征在于：所述方法的具体步骤包括： 

     1)取材方法：选取当年籽粒饱满的海南粗榧种子，采摘后，消毒处理，将消毒过的鸡蛋清与海南粗榧种子混合均匀；

     2) 芽诱导培养：诱导培养：在无菌的条件下取饱满的胚，去掉培乳，将消毒过的鸡蛋清与去掉培乳的胚混合均匀；直接接种于所述芽诱导培养基上；100～150 g的芽诱导培养基接种2-5个去掉培乳的胚；

所述诱导培养的培养条件：培养室温度为25±2℃，光照时间10～16 h/d，光照强度1000～2000 Lx；诱导培养的时间3～8天；

     3) 芽诱导培养基的配制：在MS基本培养基中添加：甘草多糖10-20 mg/L，人参多糖10-20 mg/L，所述芽诱导培养基，灭菌冷却后形成固体厚度为1.2～1.6 cm。 

具体实施方式

实施例1

1)取材方法：取当年籽粒饱满的海南粗榧种子共400粒，平均分为4组供实施例1-4使用，采摘后，消毒处理，将消毒过的鸡蛋清与海南粗榧种子混合均匀；

     2) 芽诱导培养：诱导培养：在无菌的条件下取饱满的胚，去掉培乳，将消毒过的鸡蛋清与去掉培乳的胚混合均匀；直接接种于所述芽诱导培养基上；150 g的芽诱导培养基接种5个去掉培乳的胚；

所述诱导培养的培养条件：培养室温度为25℃，光照时间10 h/d，光照强度1500Lx；诱导培养的时间5天；

     3) 芽诱导培养基的配制：在MS基本培养基中添加：甘草多糖10 mg/L，人参多糖10mg/L，所述芽诱导培养基,灭菌冷却后形成固体厚度为1.4 cm。 

100个胚，共有82个胚诱导出芽，每个胚的平均诱导芽数为7个。

实施例2

1)取材方法：选取当年籽粒饱满的海南粗榧种子，采摘后，消毒处理，将消毒过的鸡蛋清与海南粗榧种子混合均匀；

        2) 芽诱导培养：诱导培养：在无菌的条件下取饱满的胚，去掉培乳，将消毒过的鸡蛋清与去掉培乳的胚混合均匀；直接接种于所述芽诱导培养基上；100 g的芽诱导培养基接种3个去掉培乳的胚；

所述诱导培养的培养条件：培养室温度为23℃，光照时间12 h/d，光照强度1800 Lx；诱导培养的时间5天；

       3) 芽诱导培养基的配制：在MS基本培养基中添加：甘草多糖20 mg/L，人参多糖20 mg/L，所述芽诱导培养基，灭菌冷却后形成固体厚度为1.5 cm。 

100个胚，共有82个胚诱导出芽，每个胚的平均诱导芽数为5个。

实施例3

1)取材方法：取当年籽粒饱满的海南粗榧种子，采摘后，消毒处理；

     2) 芽诱导培养：诱导培养：在无菌的条件下取饱满的胚，直接接种于所述芽诱导培养基上；150 g的芽诱导培养基接种5个胚；

所述诱导培养的培养条件：培养室温度为25℃，光照时间10 h/d，光照强度1500 Lx；诱导培养的时间18天；

     3) 芽诱导培养基的配制：在MS基本培养基中添加：NAA(0.1 mg/L)+IAA(1.0 mg/L)+AgCL(8.5 g/L)，所述芽诱导培养基，灭菌冷却后形成固体厚度为1.4 cm。 

100个胚，共有28个胚诱导出芽，每个胚的平均诱导芽数为2个。

实施例4

1)取材方法：选取当年籽粒饱满的海南粗榧种子，采摘后，消毒处理，将消毒过的鸡蛋清与海南粗榧种子混合均匀；

      2) 芽诱导培养：诱导培养：在无菌的条件下取饱满的胚，直接接种于所述芽诱导培养基上；150 g的芽诱导培养基接种5个胚；