[发明专利]一种检测人尿液中纤维连接蛋白浓度的试剂盒及其方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，尤其涉及一种检测试剂盒，特别是一种采用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测人尿液中纤维连接蛋白又称纤维结合蛋白（FN）浓度的试剂盒及其方法。

背景技术

纤维连接蛋白又称纤维结合蛋白（Fibronectin，简称FN），有两条相类似的多肽链亚基组成，亚基的分子量为220-250KD。现有技术中采用免疫扩散法和ELISA双抗体夹心技术测定尿液中纤维连接蛋白（FN）浓度，其缺点为操作繁琐、工作强度大、保持时间长，一般需8-48小时、其定量的精确度差。

因尿液中纤维连接蛋白（FN）的浓度低，所以国内外至今未见有用本试剂盒及方法的报导。本专利申请的测定尿液中纤维连接蛋白又称纤维结合蛋白（FN）浓度的试剂盒及方法用于泌尿系统的肿瘤早期筛查。

发明内容

针对现有技术中存在的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种检测人尿液中纤维连接蛋白浓度的试剂盒及其方法，所述的这种检测人尿液中纤维连接蛋白浓度的试剂盒及其方法要解决现有技术中采用免疫扩散法和ELISA双抗体夹心技术测定尿纤维连接蛋白（FN）浓度过程复杂，准确性不高的技术问题。

本发明提供了一种检测人尿液中纤维连接蛋白浓度的试剂盒，包括两种试剂，I试剂由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、PEG6000、EDTA-NA₂和TX-100组成，在所述的I试剂中，所述的磷酸氢二钠的质量百分比浓度为28.6g/L，所述的磷酸二氢钾的质量百分比浓度为2.7g/L，所述的PEG6000的质量百分比浓度为50g/L，所述的EDTA-NA₂的质量百分比浓度为1g/L，所述的TX-100的体积浓度为0.2ml/L，II试剂由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、PEG6000、EDTA-NA₂、TX-100、纤维连接蛋白（FN）抗血清或者纤维连接蛋白（FN）单克隆抗体组成，在所述的II试剂中，所述的磷酸氢二钠的质量百分比浓度为28.6g/L，所述的磷酸二氢钾的质量百分比浓度为2.7g/L，所述的PEG6000的质量百分比浓度为50g/L，所述的EDTA-NA₂的质量百分比浓度为1g/L，所述的TX-100的体积浓度为0.2ml/L，所述的纤维连接蛋白（FN）抗血清或者纤维连接蛋白（FN）单克隆抗体的体积浓度为300ml/L。

进一步的，将I试剂和II试剂按照体积比4:1混合成单试剂。

进一步的，所述的纤维连接蛋白（FN）抗血清为羊抗人纤维连接蛋白（FN）抗血清或兔抗人纤维连接蛋白（FN）抗血清，所述的纤维连接蛋白（FN）单克隆抗体为鼠抗人纤维连接蛋白（FN）单克隆抗体。

进一步的，所述的TX-100的纯度为100%。

进一步的，所述的羊抗人纤维连接蛋白抗血清或兔抗人纤维连接蛋白抗血清的效价1:64。

本发明还提供了两种用透射比浊法检测人尿液中纤维连接蛋白（FN）浓度的方法,第一种采用权利要求1的试剂盒，包括一个将尿样本采用生化分析仪测定的步骤，在所述的一个将尿样本采用生化分析仪测定的步骤中，将尿样品加入I试剂R1后，37℃孵育5min，读测第1点样本A1，加入II试剂R2，37℃孵育5min，读测第2点样本A2，样本A=样本A2-样本A1；还包括一个将校准品采用生化分析仪测定的步骤，在所述的一个将校准品采用生化分析仪测定的步骤中，将校准品加入I试剂R1后，37℃孵育5min，读测第1点校准A1，加入II试剂R2，37℃孵育5min，读测第2点校准A2，校准A=校准A2-校准A1；

上述测定的参数为：温度37℃,主波长340nm，副波长700nm，尿样本或校准品3-4μl,R₁：240μl,R₂：60μl，反应时间为10分钟。

第二种采用权利要求2的检测人尿液中纤维连接蛋白（FN）浓度的方法,首先将I试剂和II试剂按照体积比4:1混合成单试剂，然后将尿样本采用生化分析仪测量，在所述的一个将尿样本采用生化与分析测量的过程中，将尿样品加入试剂后，37℃孵育10分钟，读测样本吸光度（A）

上述测定的参数为：温度37℃,主波长340nm，副波长700nm，尿样本或校准品3-4μl,试剂300μl，反应时间为10分钟。

本发明的羊抗人纤维连接蛋白（FN）抗血清、兔抗人纤维连接蛋白（FN）抗血清、鼠抗人纤维连接蛋白（FN）单克隆抗体可以在市场购买，也可以通过常规的免疫方法制备或购买。