[发明专利]一种检测鸡残差采食量性状的分子生物学方法

说明书

技术领域

本发明属于农业养殖动物分子标记辅助育种技术领域。具体涉及检测鸡残差采食量性状的方法，特别是涉及一种利用鸡GHSR基因的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP）检测鸡残差采食量性状的方法。 

背景技术

肉质细嫩鲜美的中国地方鸡种在国内外拥有广阔的市场。近年来，随着人们生活水平的提高，消费观念的转变，地方鸡销售表现出良好的趋势，成为我国养鸡业中独具特色的一个产业。在养殖业生产的竞争激烈中，想获得经济效益，就必须提高生产效率，以降低成本。然而我国地方鸡品种与白羽肉鸡相比仍存在生产效率低的缺点。通过现代育种技术提高地方鸡的生产效率是增强地方鸡市场竞争力和增加企业生产效益的重要基础。残差采食量为动物实际进食的量与维持需要和生产产品需要的差值。饲料成本占到养殖业成本的60-70%，因此残差采食量常作为衡量农业动物生产效率和养殖业经济收益的重要指标。但是在生产和育种研究过程中测定残差采食量性状难度大、成本高。残差采食量为中等遗传力性状，说明该性状的变异均具有一定的遗传基础。从分子生物学的角度去研究残差采食量的候选基因和相关分子标记，通过基因型进行选择，可以提高选择准确度并加快育种进程。 

生长激素促分泌素（Ghrelin）是一种内源性多肽，最初在1999年由Kojima等在大鼠胃组织中发现。Ghrelin可刺激生长激素的分泌，并促进肾上腺分泌激素、催乳素、皮质醇及肾上腺素的释放，对能量平衡起调节作用，并促进进食。Ghrelin基因的生理作用的调节主要是由其受体基因（Ghrelin receptor，GHSR）介导。在畜禽研究中，Jin等研究指出GHSR基因一个突变位点与山羊体长指数显著相关（Jin et al., 2010）；Zhang等研究发现GHSR基因完全连锁的2个SNP与南阳牛的体重和平均日增重显著相关（Zhang et al., 2009）；GHSR1a基因的SNP与欧洲肉牛的生长和胴体性状相关（Masanori et al., 2010）。Fang等发现隐性白来航和杏花鸡的GHSR基因内含子1上的一个突变位点与生长和胴体性状相关（Fang et al., 2009）。同时，GHSR基因SNP与脂肪沉积性状也具有一定的相关性：Nie等对8个鸡群和9个鸭群研究指出GHSR基因突变与鸡和鸭的脂肪沉积相关（Nie et al., 2009）；GHSR基因的缺失突变与白洛克鸡和杏花鸡的杂交二代脂肪性状有显著相关（Lei et al., 2007）。上述结果表明：GHSR基因可作为候选基因，研究其变异与肉鸡群体残差采食量性状变异的相关性，为标记辅助育种提供参考依据。 

单核苷酸多态性是指基因组水平上单个核苷酸的变异所引起的一种DNA序列多态性。SNP在基因组中广泛存在。通过对目标基因靶序列进行PCR扩增，之后对扩增产物进行DNA测序是检测SNP的一个常用技术。 

发明内容

本发明的目的是提供一种利用鸡生长激素促分泌素受体基因（Ghrelin receptor，GHSR）的SNP检测鸡残差采食量的方法。 

本发明所提供的检测鸡残差采食量的方法，是检测待测鸡的GHSR基因complete cds序列 自5’端起第671位碱基为A还是G。 

如果待测鸡的GHSR基因complete cds序列自5’端起第671位碱基为A时，其纯合体的基因型为AA；如果鸡的GHSR基因complete cds序列自5’端起第671位碱基为G时，其纯合体的基因型为GG；它们的杂合体基因型为AG。 

上述基因型中，GG基因型鸡的饲残差采食量比AA和AG基因型鸡分别低39.13g和27.75g，且差异达到极显著水平（P < 0.01）。而其他肉鸡重要经济性状，包括肉质性状（如胸肌肌内脂肪含量等）及胴体性状（如胸肌率、腿肌率等）在不同的基因型间没有显著差异（P > 0.05）。 

所述检测方法为PCR法和DNA测序。 

其中，PCR扩增待测鸡的包含GHSR基因complete cds 序列自5’端起第671位碱基的核苷酸序列所用的引物可为序列表中的SEQ ID No.2和SEQ ID No.3。