[发明专利]一种抗猪传染性胃肠炎病毒高免血清及其制备方法

说明书

本发明公开了一种抗猪传染性胃肠炎病毒高免血清，其为以猪传染性胃肠炎病毒HB08株CGMCC No.7807的灭活疫苗为免疫原，从免疫猪中分离血清制得。本发明制备的高免血清性状良好，无细菌、霉菌、支原体及外源病毒污染，特异性强，安全性好，人工感染治愈率达100%，血清中和效价在2⁹以上。

技术领域

本发明涉及一种抗血清的制备方法，具体是一种抗猪传染性胃肠炎病毒高免血清及其制备方法。

背景技术

猪传染性胃肠炎（porcine transmissible gastroenteritis, TGE）是引起猪腹泻的一种重要接触性病毒性肠道传染病，发病快，对2周龄以内仔猪有高度致死率，几乎能达到100%。该病是一种病毒病，目前尚无有效的治疗药物方法。给妊娠母猪接种疫苗,仔猪可通过初乳以被动免疫的方式获得抵抗力，但是随着母源抗体的消失或参差不齐，仔猪的抵抗力逐渐下降或不同，对传染性胃肠炎的易感性也表现不同，一旦发病，就造成巨大的经济损失。采用高免血清进行群体治疗是可行的办法，也是以被动免疫的方式使仔猪获得免疫力，达到保护仔猪的目的。

但是临床上流行的传染性胃肠炎病毒一旦发生变异，由此制备的高免血清治疗效果就会减弱，感染猪的发病率和死亡率就会增加。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种抗猪传染性胃肠炎病毒高免血清及其制备方法。

首先，本发明提供一种抗猪传染性胃肠炎病毒高免血清，其为以猪传染性胃肠炎病毒HB08株CGMCC No.7807的灭活疫苗为免疫原，从免疫猪中分离血清制得。

其中，所述的猪传染性胃肠炎病毒HB08株CGMCC No.7807的灭活疫苗为将猪传染性胃肠炎病毒HB08株灭活与油佐剂乳化制备而成。

进一步地，本发明还提供所述抗猪传染性胃肠炎病毒高免血清制备方法，包括如下步骤：

1）免疫：以猪传染性胃肠炎病毒灭活疫苗为免疫原免疫50-60日龄长大二元猪，第一次免疫：肌肉注射共4ml，第二次免疫：在第一次免疫后14日进行，免疫剂量8ml，分两点注射，第三次免疫：在第二次免疫后14日进行，免疫剂量16ml，分三点注射；

2）采血：最后一次免疫后15～21日，检测中和抗体效价，达到2⁹以上时，杀猪无菌放血；

3）血清分离与制备：用消毒刀将凝固血划成1-3平方厘米的小块，滤出血清，分装于无菌生理盐水瓶中，其余置于-70℃保存。

本发明的TGEV HB08株是申请人从河北一发病猪场分离到的强毒株经过125代致弱后获得的TGEV 弱毒株，是目前国内的TGEV流行株，该疫苗株毒力稳定，安全，免疫原性好，能够抵抗目前临床上流行的强毒株的攻击，保护率达90%以上。

将分离到的TGEV 125-165代TGEV致弱株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号是CGMCC No. 7807，保藏时间是2013年6月28日。

本发明成功试制出了抗猪传染性胃肠炎病毒的高免血清，其物理性状良好，无细菌、霉菌和支原体生长，无外源病毒污染，中和抗体效价在2⁹倍以上。试验结果表明，本血清不但具有较高的抗体效价，而且还具有很强的特异性，完全符合检测用血清标准的要求，为评价疫苗免疫效力提供了有力工具。血清效力评估结果表明，本发明制备的高免血清治愈率更高。

附图说明

图1为TGEV CPE图片（400×）。

图2为TGEV分离毒S基因PCR检测结果。图中，M：DNA Marker DL2000；1：样品；2：阴性对照。