[发明专利]抗猪流行性腹泻病毒高免血清及其制备方法

说明书

本发明公开了采用猪流行性腹泻病毒ZJ08株CGMCC No.7806的的灭活疫苗为免疫原免疫50‑60日龄长大二元猪，经三次免疫，制备了高免血清。本发明制备的高免血清性状良好，无细菌、霉菌、支原体及外源病毒污染，特异性强，安全性好，人工感染治愈率达100%。血清中和效价在2⁶以上，对血清进行分装，‑70℃，保存期12个月。

技术领域

本发明涉及一种抗病毒血清的制备方法，具体是一种抗猪流行性腹泻病毒高免血清及其制备方法。

背景技术

猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea, PED）是引起猪腹泻的一种急性、接触性病毒性肠道传染病，以水样腹泻、呕吐、脱水和食欲下降为特征。PEDV可在猪群中持续存在，各种年龄猪均易感。哺乳仔猪、架子猪和育肥猪的发病率可达100%，尤以哺乳仔猪严重，病死率达100%。该病是一种病毒病，目前尚无有效的治疗药物方法。给妊娠母猪接种疫苗，仔猪可通过初乳以被动免疫的方式获得抵抗力，但是随着母源抗体的消失或参差不齐，仔猪的抵抗力逐渐下降或不同，对流行性腹泻的易感性也表现不同，一旦发病，就造成巨大的经济损失。采用高免血清进行群体治疗是以被动免疫的方式使仔猪获得免疫力，达到保护仔猪的目的。目前为止，这种方法是可行的。但是临床上流行的猪流行性腹泻病毒毒株一旦发生变异，由此制备的高免血清治疗效果就会减弱，感染猪的发病率和死亡率就会增加。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种抗猪流行性腹泻病毒高免血清及其制备方法。

首先，本发明提供一种抗猪流行性腹泻病毒高免血清，其为以猪流行性腹泻病毒ZJ08株CGMCC No.7806的灭活疫苗为免疫原，从免疫猪中分离血清制得。

其中，所述的猪流行性腹泻病毒ZJ08株CGMCC No.7806的灭活疫苗为将猪流行性腹泻病毒ZJ08株灭活与油佐剂乳化制备而成。

本发明还提供所述的抗猪流行性腹泻病毒高免血清的制备方法，包括如下步骤：

1）免疫：以所述的猪流行性腹泻病毒灭活疫苗为免疫原免疫50-60日龄长大二元猪，第一次免疫：肌肉注射共4ml，第二次免疫：在第一次免疫后14日进行，免疫剂量8ml，分两点注射，第三次免疫：在第二次免疫后14日进行，免疫剂量16ml，分三点注射；

2）采血：最后一次免疫后15～21日，检测中和抗体效价，达到2⁹以上时，杀猪无菌放血；

3）血清分离与制备：用消毒刀将凝固血划成1-3平方厘米的小块，滤出血清，分装于无菌生理盐水瓶中，其余置于-70℃保存。

本发明的PEDV ZJ08株是申请人从浙江一发病猪场分离到的强毒株经过105代致弱后获得的猪流行性腹泻病毒弱毒株，是目前国内的PEDV流行株，该疫苗株毒力稳定，安全，免疫原性好，能够抵抗目前临床上流行的强毒株的攻击，保护率达90%以上。

将分离到的PEDV 105-145代PEDV致弱株命名为猪流行性腹泻病毒ZJ08株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号是CGMCC No. 7806，保藏时间是2013年6月28日。

本发明成功试制出了抗猪流行性腹泻病毒的高免血清，其物理性状良好，无细菌、霉菌和支原体生长，无外源病毒污染，中和抗体效价在2⁶倍以上。试验结果表明，本血清不但具有较高的抗体效价，而且还具有很强的特异性，完全符合检测用血清标准的要求，为评价疫苗免疫效力提供了有力工具。血清效力评估结果表明，本发明制备的高免血清治愈率更高。

附图说明

图1为PEDV CPE图片（400×）。