[发明专利]一株猪流行性腹泻病毒及其应用

说明书

本发明公开了一株猪流行性腹泻病毒弱毒株ZJ08株及其应用。本发明弱毒株的微生物保藏号是：CGMCC No.7806。本发明PEDV弱毒株安全性好，对妊娠母猪、仔猪等各年龄猪均安全。该毒株对3日龄仔猪的主动保护率达100%，被动保护率达94.7%以上，表明本发明对于猪流行性腹泻具有良好的免疫保护效果。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一株流行性腹泻病毒及其应用。

背景技术

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhoea,PED)是引起猪腹泻的一种重要急性、接触性病毒性肠道传染病，以水样腹泻、呕吐、脱水和食欲下降为特征。该病最早于上世纪70年代发生在英国和比利时，1973年先后在我国上海、辽宁、吉林等地分离到PEDV。PEDV可在猪群中持续存在，各种年龄猪均易感。哺乳仔猪、架子猪和育肥猪的发病率可达100％，尤以哺乳仔猪严重，病死率达100％。目前，还没有特效药物抵抗猪流行性腹泻病毒，由于该病发病急，流行快，猪群一旦感染，就会给养殖户带来巨大的经济损失。

目前，免疫接种是防制该病的重要手段，国内外有使用疫苗的报道，但是效果不尽人意。尤其近几年，原来的疫苗对猪腹泻病的保护效果越发有限，临床上不断出现腹泻病例，在有的地区，猪流行性腹泻抗原阳性率可高达70％多，这表明研制出一种能够有效防制猪流行性腹泻的疫苗迫在眉睫。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一株猪流行性腹泻病毒及其应用。该弱毒株遗传稳定、安全性好，用其制备的疫苗对于猪流行性腹泻具有良好的保护效力。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术途径来实现的：

从浙江某猪场送检猪流行性腹泻抗原阳性的病料中分离到PEDV。将分离到的猪流行性腹泻病毒在Vero细胞上连续传代100代，并在此过程进行了克隆纯化，然后继续在Vero细胞上传代至145代。将第145代病毒进行RT-PCR检测，扩增S基因片段为484bp。从第105代开始ORF3基因突然出现49个核苷酸的缺失，第105代、125代、145代保持稳定缺失49个核苷酸。

致弱性试验结果表明，从第105代开始，PEDV对仔猪失去致病性；将PEDV 125代种毒在猪体连传5代，毒力依然很稳定，没有任何返强现象。

经鉴定，分离到的病毒株为猪流行性腹泻病毒新病毒株，将105～145代致弱毒株种毒命名为猪流行性腹泻病毒ZJ08株，并于2013年06月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC No.7806。

本发明还提供含有猪流行性腹泻病毒ZJ08株的活疫苗。

在本发明一个实施方案中，所述的活疫苗中，猪流行性腹泻病毒弱毒株ZJ08株的含量为≥10^5.0TCID₅₀/ml。

本发明还提供所述毒株在制备治疗猪流行性腹泻病毒感染药物中的应用。

本发明弱毒株的安全性好，安全试验结果表明，该毒株对妊娠母猪、仔猪等各年龄猪均安全。

本发明对3日龄仔猪的主动保护率达100％，被动保护率达94.7％以上，而对照组的发病率达100％，表明本发明对于猪流行性腹泻具有良好的免疫保护效果，该效果已高于国内PEDV弱毒疫苗株CV777的免疫效果。

本发明弱毒株还可应用于制备成单苗或联苗等。

附图说明

图1 PEDV(ZJ08株)CPE图片(400×)。

图2 PEDV(ZJ08株)分离毒S基因PCR检测结果。图中，M：DNA Marker DL2000；1：样品；2:阴性对照。