[发明专利]一种白藜芦醇苷转化为白藜芦醇的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种白藜芦醇苷转化为白藜芦醇的方法，尤其是涉及一种利用微生物法将白藜芦醇苷转化为白藜芦醇的方法。

背景技术

白藜芦醇是一种天然活性多酚化合物，具有抑制肿瘤、保护心血管、抗氧化、抗自由基等多种药理作用，被列为抗心血管病、抗癌最有前途的药物之一。

目前,制备白藜芦醇的方法主要包括：1.植物提取法，转化率低，成本高。2.化学合成法，合成步骤繁多,白藜芦醇极易被氧化,反应产率受限制;合成过程所用的许多催化剂和化学试剂都具有一定危害性,环境污染严重。3.植物细胞培养法，高产细胞株的遗传性状不稳定等原因,难以迅速实现大规模工业化生产。由此可见，上述方法各有利弊。寻找一种转化率高,成本低的白藜芦醇制取方法，已成为目前白藜芦醇生产行业的当务之急。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是，克服现有技术的不足，提供一种转化率高,成本低的白藜芦醇苷转化为白藜芦醇的方法。

本发明解决其技术问题采用的技术方案是：一种白藜芦醇苷转化为白藜芦醇的方法，包括以下步骤：

（1）内生真菌L1孢子悬浮液制备：从内生真菌L1　PDA斜面上挑五环菌体于10ml生理盐水中，充分震荡；

所述内生真菌L1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.4558（参见申请号为201110130127.1的专利申请文件）；

（2）培养基准备：将新鲜虎杖粉碎至200目，按质量比虎杖1.5wt%、无水乙醇 2 wt%、 CMC-Na 2.5 wt%、 NH₄NO₃ 0.2 wt%、Na₂HP0₄0.06 wt%、 CaCl₂0.1 wt%配制发酵培养基，调起始pH值为4.5－5.5； 

（3）发酵：先将步骤（2）中的培养基经121℃、30min湿热灭菌；再将内生真菌L1孢子悬浮液，接入起始pH 4.5－5.5的培养基中,接种量为相当于培养基体积的5－10％（优选 9%）, 在250ml三角瓶中，培养基的装液量为30mL，在培养条件为温度 26－30℃、转速 200－220r/min下,发酵36－60h，即成。

HPLC检测发酵液中白藜芦醇苷和白藜芦醇含量,转化率≥60%,转化后发酵液中白藜芦醇含量≥30 u g/mL。

本发明之微生物法转化白藜芦醇苷为白藜芦醇，先从新鲜虎杖上分离、纯化出内生真菌L1，然后根据L1的生长性质特点，配制特定的培养基，在一定培养条件下通过L1转化虎杖白藜芦醇苷为白藜芦醇，确保白藜芦醇的高含量，进而提高白藜芦醇的产量。白藜芦醇苷就是虎杖的组成成分，传统提取只能提取虎杖中的白藜芦醇不能提取白藜芦醇苷，本发明就是通过转化虎杖中的白藜芦醇苷为白藜芦醇，进而提高产量。

本发明工艺发酵条件简单，易控制，酶转化专一性强，转化率高，成本低，对环境友好，是生产制备天然白藜芦醇的最好途径之一；且可实现工业化生产,环境污染小，资源环境友好，是生产天然白藜声醇高值开发利用的重要途径。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

本实施例包括以下步骤：

（1）内生真菌L1孢子悬浮液制备：从内生真菌L1　PDA斜面上挑五环菌体于10ml生理盐水中，充分震荡；

所述内生真菌L1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.4558（参见申请号为201110130127.1的专利申请文件）；

（2）培养基准备：将新鲜虎杖粉碎至200目，取200目新鲜虎杖粉末0.45g（虎杖1.5wt%）、无水乙醇0.6g（2%）、CMC-Na0.75g（2.5%）、NH₄NO₃0.06g（0.2%）、Na₂HP0₄0.018g（0.06%)、CaCl₂0.03g（0.1%）配制成发酵培养基；调起始pH为5.5； 

（3）发酵：先将步骤（2）中的培养基经121℃、30min湿热灭菌；再将2.7ml的内生真菌L1孢子悬浮液接入250ml三角瓶中，所述三角瓶中装有30mL起始pH 5.5的培养基，再在培养条件为温度 28℃、转速 220r/min下,发酵60h，即成。