[发明专利]一株高抗逆性屎肠球菌及其培养方法和应用

说明书

本发明涉及一株高抗逆性屎肠球菌及其培养方法和应用。屎肠球菌WEI‑10分离自60日龄仔猪粪便，能够耐受低pH环境和高浓度猪胆盐，可以在胃肠消化液中长时间保持活性，而且对大肠杆菌、沙门氏菌、藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌均有抑菌作用，抑菌圈直径达到30‑40mm。将上述发酵液通过高速管式离心机收集菌体后，与专用保护剂混合，真空冷冻干燥冻干44h后结束，获得的干燥菌粉用粉碎机破碎后与同样粒度的麸皮按照一定比例混合，获得微生态制剂产品。该产品用作微生物饲料添加剂添加于畜禽饲料中，可以调节畜禽肠道微生态平衡，提高畜禽的生产性能和抗病能力，有望成为饲用抗生素的替代产品。

技术领域

本发明涉及一株屎肠球菌，特别是涉及一株高抗逆性屎肠球菌及其培养方法和应用。

背景介绍

饲料是动物的食品和人类的间接食品，饲料安全工程无疑是食品安全工程的重要一环。我国已启动“饲料安全工程”，并禁用了一批毒性和残留较大的饲料添加剂产品。加快新型饲料添加剂的开发与生产，特别是是替代饲用抗生素的饲料添加剂的生产是实现健康养殖及养殖业可持续发展的有力保障。微生态制剂作为一种绿色、安全的饲料添加剂成为产业化发展的热点，是替代饲用抗生素的主要产品之一，已成为研制热点和未来的发展方向。

目前市售微生态制剂产品良莠不齐，很多产品所用菌种对胃肠消化液、胆盐耐受能力差，真正能够到达小肠发挥功效的菌种很少。另一方面，很多产品的活菌数并未达到其标注的最低活菌数，致使产品的效果也会大打折扣。究其原因是所用菌种未经严格筛选，菌种发酵时未能实现低成本、高产量的优化培养，进而导致菌种的益生功效不明显，发酵结束时活菌数达不到预期要求。此外，为了保证微生态制剂产品的活性，发酵后的菌体必须经过适当的后处理才能保证产品在保藏、运输和使用过程中微生物活性不会损失太大。针对乳酸菌而言，太过激烈的后处理条件，如喷雾干燥、流化床干燥等常规干燥方法会导致菌体的大量死亡。最适合乳酸菌后处理的工艺是真空冷冻干燥法，这种方法虽然成本稍高，但是可以保证干燥后活菌数损失最小，保存时间最长。因此，分离、筛选对胃肠消化液和胆盐具有高度耐受性的优良益生菌株，并优化优良菌株的低成本、高产量的发酵工艺和后处理工艺是开发乳酸菌微生态制剂的必由之路。

屎肠球菌是农业部《饲料添加剂品种目录》所列菌种，是微生态制剂常用乳酸菌菌种。屎肠球菌产酸，能够调节肠道菌群，维持肠道微生态平衡。在动物体内对病原微生物有拮抗作用，能够增强动物机体的免疫功能，产生有益的代谢产物，激活酸性蛋白酶的活性，参与机体的新陈代谢，防止有害物质产生。

因此，筛选一株高抗逆性屎肠球菌，并开发一种低成本、高产量，能长期保持活性的屎肠球菌微生态制剂，对于发展绿色饲料，保证食品安全具有重要的意义。

发明内容

本发明的第一个目的是提供了一株高抗逆性屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No7746。

从健康仔猪粪便中分离、筛选得到一株乳酸菌，经16S rDNA测序鉴定为屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10，并于2013年6月19日送中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCC No.7746，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所邮编：100101电话：86-10-64807596。

屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746属革兰氏阳性细菌，圆形或椭圆形，呈链状排列，无芽孢，无鞭毛。生长温度范围在30-40℃，适宜pH值的范围6.0-8.0，是兼性厌氧乳酸菌。该菌株在MRS培养基中生长良好，繁殖速度快，生长曲线如图1所示，2h后进入对数期，12h菌数增殖达到最高，稳定期活菌数为6.5×10⁸-7.8×10⁸CFU／mL。