[发明专利]猪IFIT1基因在抗PRRS病毒中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地说，涉及猪IFIT1基因在抗PRRS病毒中的新功能。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS），俗称“蓝耳病”是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的，该病毒是巢状病毒目动脉炎病毒科的一个成员，同属的病毒还有马动脉炎病毒，鼠乳酸脱氢酶酶病毒和猴出血热病毒。该病主要引起猪的繁殖与呼吸症状，表现为间质性肺炎和母猪流产木乃伊胎等，每年对全世界的养猪业造成了巨大的经济损失。2007年在中国爆发了一场高热病，该病迅速在全国范围扩散，超过200万头猪被感染，40万头猪死亡，该病最后证实是由一种高致病性的蓝耳病毒引起的。PRRSV主要感染猪的肺泡巨噬细胞，现在研究表明在感染PRRSV后，先天免疫中PRRSV感染不能引起有效的I型干扰素应答，体液免疫不能及时产生有效的中和抗体，而且会形成抗体依赖的病毒增强效应，最终导致免疫抑制和持续感染。由于该病毒的突变率极高，传统疫苗方法也不能有效控制该病，很多研究都致力于寻找RNAi，干扰素等新的方法来针对该病毒，用于弥补传统方法的不足。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种与抗蓝耳病相关的新基因IFIT1，及其通过对IFIT1基因进行过表达，从而抑制PRRS病毒在细胞中的复制。

本发明的技术方案如下：

本发明首先提供了猪IFIT1基因在抗PRRS病毒中的应用，其是通过IFIT1基因在细胞中的过表达来抑制PRRS病毒在细胞中的复制。

本发明还提供了一种过表达IFIT1基因的载体。

作为优选，所述载体为导入IFIT1基因CDS序列的pCMV-Myc-N载体。

本发明还提供了含有所述载体的转基因细胞。

进一步地，所述转基因细胞为除胚胎细胞外的猪体细胞。

本发明还提供了一种制备克隆胚胎的方法，其以权利要求5所述转基因细胞为核移植供体细胞，离体的卵母细胞为核移植受体细胞，通过核移植技术获得克隆胚胎。

本发明还提供了利用IFIT1基因表达量筛选抗PRRS病毒猪的方法，所述方法为通过对猪的IFIT1基因的表达量进行测定，IFIT1表达量高的猪比IFIT1表达量低的猪具有更高的抗PRRS病毒感染能力。

本发明的有益效果在于：

本发明所鉴定的与抗蓝耳病相关的新基因IFIT1(interferon-induced protein with tetratricopeptide repeat1)是一种干扰素诱导蛋白，有研究表明它具有抗病毒的作用。本发明人首次利用生物信息学结合细胞生物学实验的方法，证明了IFIT1具有抑制PRRS病毒复制的作用。

本发明发现的新的抑制PRRSV复制的基因IFIT1可以有以下两个用途：

1.分析表明，相对于没有过表达IFIT1基因的细胞，过表达IFIT1基因的细胞可以显著抑制PRRS病毒的复制，因此，可以通过对猪的IFIT1基因的表达量进行测定，IFIT1表达量高的猪可能会比IFIT1表达量低的猪更加抗PRRSV的感染，从而达到根据IFIT1基因的表达量高低来筛选抗PRRSV的猪。

2.可以利用转基因等基因工程学的方法，使得IFIT1基因在猪中的表达量升高，从而得到IFIT1表达量高的猪，进而培育出抗PRRSV复制的猪。

附图说明

图1为本发明实施例1中转录组数据分析得到的IFIT1在通城猪和长白猪感染PRRSV的第0天，第3天，第5天和第7天肺组织中的表达模式和相对表达量；横坐标代表时间点，纵坐标代表RPKM（相对表达量）。

图2为本发明实施例2中原始载体pCMV-Myc-N的载体图谱。

图3为本发明实施例2中MARC145细胞攻毒实验后24小时PRRSV的拷贝数；横坐标代表对照组和攻毒组；纵坐标代表PRRSV ORF7的相对表达量。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册（New York:Gold Spring Harbor Laboratory Press,1989），或按照制造厂商说明书建议的条件。

实施例1利用分析转录组数据方法发现新的抗PRRSV感染的基因IFIT1