[发明专利]化合物Ochrephilone在制备抗结核病药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物学领域，具体涉及化合物Ochrephilone在制备抗结核病药物中的应用。

背景技术

结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，根据世界卫生组织从204个国家收集到的最新数据，结核病仍是目前威胁人类的一个主要传染病杀手。《2012年全球结核病控制报告》中指出，2011年全球新增结核病患者870万人，全球死于结核病的人数为140万人。在中国，受结核分枝杆菌感染人数甚至超过5.5亿，如果不采取有效的控制措施，在未来10年内，我国可能有近5000万的感染者发生结核病。目前临床上用于治疗结核病的有效药物少，治疗周期长，对人体毒性大，同时耐药性的菌株频频出现，使得新型安全高效的抗结核药物开发迫在眉睫。

结核分枝杆菌丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶G是一种类真核蛋白激酶，可溶性的细胞质蛋白，无跨膜结构域，750个氨基酸，分子量约为82KDa。它的结构包括氨基端的硫氧还蛋白结构域，中间激酶催化活性结构域和羧基端的四肽重复序列结构域。激酶催化结构域本身没有催化活性，需要两端的结构域的调控作用，氨基端的硫氧还蛋白结构域中的半胱氨酸可以调节PKnG的氧化还原状态，体外实验鉴定氨基端的Thr63是主要的磷酸化位点。

结核分枝杆菌丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶G是结核分枝杆菌在感染宿主细胞后，分泌到宿主细胞内的蛋白。结核分枝杆菌被宿主细胞吞噬后形成吞噬体，通过阻止吞噬体与溶酶体的的融合，从而不被溶酶体降解，此时的结核分枝杆菌代谢活动降到最低，生长繁殖几乎停止，不易被抗菌药物杀灭，当机体免疫力降低时，结核分枝杆菌又继续生长繁殖，恢复致病力。结核分枝杆菌这种“持留”状态的形成机制目前研究的不是很清楚，但已有实验证实PKnG在阻止结核分枝杆菌到溶酶体的转运过程中发挥着重要的作用，其中PKnG氨基端的73个氨基酸，硫氧还蛋白结构域以及Thr63在调节PKnG介导的结核分枝杆菌在宿主细胞内的存活是必需的。PKnG成为可能的抗结核病药物的靶点之一，并以其抑制剂筛选抗结核病药物，有助于新型、安全、高效特异的天然活性提取物药物的研发，有利于结核病的控制甚至根除。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中缺乏有效抗结核病药物的缺陷，提供一种化合物在制备抗结核病药物中的应用。

本发明通过以下技术方案实现上述目的。

本发明通过研究发现，化合物Ochrephilone具有有效抑制结核分枝杆菌丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶G自我磷酸化的活性，因此，本发明提供化合物Ochrephilone在制备抗结核病药物中的应用。

本发明同时还提供化合物Ochrephilone在制备结核分枝杆菌丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶G抑制剂药物中的应用。

具体地，所述药物为抑制结核分枝杆菌丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶G的自我磷酸化的药物。

本发明所用的化合物Ochrephilone是从海洋微生物中分离得到的天然代谢活性产物，化合物Ochrephilone的具体分离方法可具体参考文献（肖碧红, 佘志刚, 雷晓凌, 等. 南海沿海海藻内生真菌 ZJ27 次级代谢产物研究[J]. 中药材, 2011, 34(4): 544-546.），其分子结构式如式（Ⅰ）所示。化合物Ochrephilone还可以通过其他方法制备得到，无论哪种方法得到的化合物Ochrephilone的结构式都是一样的，所以其功能都是一样的。所以化合物的来源对本发明不做任何形式的限定。

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本发明同时提供了一种抗结核病药物，所述药物含有Ochrephilone或其药学上可接受的盐或衍生物。该药物还可以与已知的抗结核药物同时使用。该药物也可含有药学上可接受的载体和/或赋形剂。

本发明首次发现，Ochrephilone可以以结核分枝杆菌丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶G作为靶点，抑制该蛋白的自我磷酸化作用。

所述的结核分枝杆菌丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶G基因的多核苷酸，具有SEQ ID NO:1所示的序列，其在基因文库中登录号为：NC_000962.3。

本发明所述的结核分枝杆菌丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶G是使用重组技术从原核宿主中产生。其具体制备方法包括如下步骤：

（1）利用PCR扩增法、重组法或者人工合成方法获得编码SEQ ID NO:1所述结核分枝杆菌丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶G的多核苷酸；

（2）将多核苷酸片段克隆并转导或者转化进合适的宿主细胞；

（3）在合适的培养基中培养宿主细胞；

（4）从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。