[发明专利]一种水性胶层析介质及用于检测的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学检测领域，特别是涉及一种水性胶层析介质及用于检测的方法。

背景技术

不完全抗体（主要为IgG类抗体）与红细胞相应抗原结合后（致敏红细胞）在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，但在加入抗-IgG的抗体(二抗)后，该二抗与致敏红细胞上不完全抗体的Fc段结合，得以搭桥，出现凝集反应，该试验称为抗人球蛋白试验（anti-human globulin test or Coombs test），在临床常规的抗体筛检、鉴定以及交叉配血中，要求对具有输血史、妊娠史及输用过血液制品的受血者和供血者都应进行不完全抗体检测。临床上保障安全输血，诊断新生儿溶血病、自身免疫性溶血病、药物免疫溶血性疾病等以及血型学研究工作中，对不完全抗体的检测是最重要内容之一。对此，传统的试管抗人球蛋白试验1945年发明，沿用至今只能应用于少量标本的确证实验，由于其繁琐的操作使其始终未成为临床常规检测手段；目前应用最多的微柱凝胶抗人球蛋白实验，这不需要洗涤过程，但存在着试剂价格高，血液标本中纤维蛋白原容易产生假阳性的缺点；此外，各种“增强实验”，包括蛋白酶、白蛋白、聚凝胺等，都因为各自缺点也没能成为检测血型不完全抗体的可靠方法。

1945年科学家Coombs RRA等根据一些病人的病症，确信他们的血液中应该有抗患者红细胞的凝集素，但将这些血清与红细胞混合后并未出现凝集反应，而当加入人血清抗体（抗人球）后，以其搭桥则出现凝集反应，最初此方法只用于检测血清中不完全抗体，经过发展同样用于检测病人体内已经结合了抗体和/或补体的红细胞，即经典的Coombs test，前者为间接抗人球蛋白实验，后者为直接抗人球蛋白实验，经典的Coombs test理应是现在和将来对不完全抗体检测的确定性、标准性试验，发明之初也被希望能应用于临床常规不完全抗体检测以及出红细胞以外的其他小分子抗原抗体检测，但由于抗人球与血清中致敏红细胞的抗体及血清中游离的免疫球蛋白都能结合，因此在常规的试管Coombs test时首先要洗涤去除未与红细胞结合的游离免疫球蛋白，再加入抗人球，这样避免抗人球被反应液中非特异性的免疫球蛋白中和而出现的假阴性反应，这需要生理盐水离心洗涤至少三次以上，使反应液中非特异性的免疫球蛋白残余要少于原量的1/5000，由此导致其操作繁琐费时，且一些弱反应抗体不能检出等缺点，不能满足临床进行血型相容性试验时间性要求，故此方法始终未能成为临床常规检测项目。为解决这一难题人们发展出了一些增强介质如聚凝胺（polybrene）、聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）、低离子强度溶液（low ionic strength saline，LISS）以及酶液等，利用这些介质的技术都可以减少或避免洗涤程序、减少孵育时间并增强抗原抗体反应，但同样存在一些缺点：如聚凝胺法易引起假阴性，操作过程不易规范化；以PEG为介质的试验中，抗人球蛋白试剂中的抗补体成分会导致假阳性反应；有些抗体（抗-K）在低离子溶液中与红细胞结合量要比在正常盐水中要少的多，所以在低离子溶液中进行试验时会导致该抗体的漏检；酶处理红细胞,因为对某些血型抗原的破坏而出现假阴性反应，也可能因为蛋白酶对红细胞膜多肽分子的消化，使其暴露出隐蔽抗原，进而与抗人球蛋白试剂中异种抗体，或血清反应液中的多凝集抗体作用出现假阳性反应。