[发明专利]一种抗 CD26 抗体及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于基因工程抗体技术领域，尤其是涉及一种新的可与CD26特异性结合的高亲和力全人源抗体、制备方法及其应用。

背景技术

CD26是一种普遍存在的多功能Ⅱ型跨膜糖蛋白，具有多种生物学功能，也可以以溶解形式存在于血浆中。CD26常以同源二聚体形式存在，其单体含766个氨基酸，相对分子质量约110kDa。氨基酸残基从内向外分为5个部分：胞内区(1～6)、跨膜区(7～28)、高度糖基化区(29～323)、富含半胱氨酸区(324～551)和C端催化结构域(552～766)，CD26分子三维结构与功能密切相关。CD26的C端催化结构域发挥二肽基肽酶IV(Dipeptidyl peptidase4，DPPIV)活性，可以水解体内多种底物发挥生物学作用，富含半胱氨酸区可以和体内多种分子相互作用，从而参与体内免疫功能。CD26在免疫调节中的作用已被广泛研究，CD26是T细胞活化的分子标志，也在T细胞信号转导过程中作为共刺激分子，还涉及多种T细胞功能，包括T细胞发生成熟及迁移，细胞因子分泌，T细胞依赖的抗体产生，B细胞免疫球蛋白转型等。CD26在自身免疫性疾病的发生发展过程中发挥重要作用，已成为临床疾病的分子标志，并被认为是某些免疫性疾病的治疗或诊断靶点。（Ohnuma et al.(2011)Adv Clin Chem,53,51-84）

CD26由于可以和多种蛋白相互作用，如ADA、CD45、FAP-alpha等，还可以结合ECM，导致表达CD26细胞浸润活性的增加或降低，可见CD26在肿瘤生物学发挥重要作用。CD26的表达量在多种的新生瘤细胞表面或血清中会升高，例如，CD26高表达于某些进攻性T细胞恶性肿瘤，恶性间皮瘤，肾瘤，某些结肠癌（Havre et al.(2008)Front Biosci,13,1634-1645）。某些CD26+结肠癌细胞亚群，CD26+恶性间皮瘤细胞都有明显肿瘤干细胞特征（Ghani et al.(2011)Biochem Biophys Res Commun,404,735-742and Pang et al.(2010)Cell Stem Cell,6,603-615），因此CD26可作为多种肿瘤的分子标志。

已有多种结合CD26的鼠源抗体报道（Havre et al.(2008)Front Biosci,13,1634-1645），在治疗某些CD26高表达癌症，以及抑制细胞迁移，血管形成方面都能发挥作用。有文献报道抗CD26的鼠单克隆抗体1F7与CD26的结合导致细胞周期停滞在G1/S限制点，并且CD26的结合通过增强表达细胞周期调节蛋白质p21来诱导CD26Jurkat转染子停滞在G1，用1F7抗体治疗可以抑制CD26+肿瘤的形成，并在小鼠模型中增强存活率。其他抗CD26的鼠单克隆抗体E19和E26，这些抗体表现出抑制成纤维细胞和创伤细胞的细胞迁移来形成单层的抑制作用、对血管形成的抑制效果、以及对人皮肤微血管内皮细胞的侵入和毛细管新支的形成具有抑制效果。由此可见，抗CD26单克隆抗体可通过改变CD26的活性在治疗多种疾病中发挥作用。但是，鼠单克隆抗体在直接应用于人体治疗时会产生人抗鼠抗体反应（Human Anti-Mouse Antibody,HAMA），人体会产生抗小鼠抗体的抗体，不仅会减弱疗效，也会导致急性致敏反应。为了克服鼠源单抗的缺点，基因工程抗体技术发展出了人-鼠嵌合抗体，嵌合抗体由鼠源性抗体的V区基因与人抗体的C区基因拼接为嵌合基因，使鼠源性成分减少70%左右，以及人源化抗体，在嵌合抗体的基础上进一步用人抗体可变区的骨架区（FR）替代鼠FR，大大减少了抗体的鼠源成分。但残留的少量鼠抗体的序列仍有可能潜在引发HAMA。

发明内容

本发明所要解决的技术问题：本发明旨在提供一种能有效的、特异性结合人CD26的全人源抗体，及其在制备治疗以CD26的表达，特别是过量表达为特征的疾病，诊断CD26变化性表达疾病的药物中的新用途。更具体地说：

本发明第一个目的是提供一种来源于人源的抗体或其片段，所述抗体或其片段特异性结合人CD26，优选特异性结合CD26胞外区，所述抗体或其片段的氨基酸序列包括选自含有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8一组序列的6个互补决定区的任何区域的单克隆抗体或其片段或其片段的偶联物，或通过氨基酸置换或者修饰得到的氨基酸序列。