[发明专利]一种利用细菌发酵液制备纳米银的简单方法

说明书

技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用细菌发酵液制备纳米银的简单方法。

背景技术：

纳米银（Silver nanoparticles,简称Ag-NPs）被称为二十一世纪新一代的抗菌剂，它具有广谱的抗菌性能、高效的抗菌活性、低毒和不易使微生物产生抗药性的优点。纳米银目前已被广泛应用于各种医疗材料中，如创伤敷料、外科医生的面具、医用导管、医用手术器械、植入人体的组织等。基于纳米银优良的抗菌性能，其应用前景广阔，在生活用品领域、医疗卫生领域、建材领域、电子工业领域等都有广泛的市场需求。

纳米银粒子的制备方法很多，主要是液相化学还原法、电化学法、光化学还原法等化学方法，和还原球磨法、蒸发冷凝法、雾化法等物理方法，其中尤以化学还原法比较常见，但也需要严格控制反应条件，对制备技术的要求比较高。

发明内容：

本发明的目的是提供一种简便易行、可操作性强、成本低廉，且制备过程不会向环境排出有毒有害物质，比较环保的利用细菌发酵液制备纳米银的简单方法。

本发明的利用细菌发酵液制备纳米银的简单方法，其特征在于，包括以下步骤：将金黄色葡萄球菌或粪肠球菌接种到Mueller–Hinton（MH）培养基中，于25～37℃振荡培养12-72小时，然后将菌体和菌悬液分离开，取菌悬液，往菌悬液中加入硝酸银溶液，使银离子的浓度为0.5-10mM，然后在25～37℃条件下振荡反应5-72小时，再经超声处理，超声后的溶液再经过滤，滤液即为纳米银溶液。

所述的超声处理优选为在冰浴条件下超声1-5min左右，超声输出功率为150-200瓦特。

所述的过滤优选是将超声后的溶液用孔径0.1-0.22μm的滤膜过滤。

本发明还提供了另外一种利用细菌发酵液制备纳米银的简单方法，其特征在于，包括以下步骤：将金黄色葡萄球菌或粪肠球菌接种到Mueller–Hinton（MH）培养基中，于25～37℃振荡培养12-72小时，然后将菌体和菌悬液分离开，取菌悬液，往菌悬液中加入硝酸银溶液，使银离子的浓度为0.5-1mM，然后在25～37℃条件下振荡反应5-24小时，再经过滤，滤液即为纳米银溶液。

所述的过滤优选是用孔径0.1-0.22μm的滤膜过滤。

本发明的Mueller–Hinton（MH）培养基是现有技术中已知的培养基，即水解酪蛋白（Mueller-Hinton）培养基，可以直接从试剂公司购买。

本发明利用细菌的发酵液制备纳米银粒子，制备方法简便易行，可操作性强，成本低廉，且制备过程不会向环境排出有毒有害物质，是一项既简单又环保的纳米银制备技术。

附图说明：

图1-图7分别是实施例1-7的纳米银溶液的电镜图。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

将金黄色葡萄球菌接种到100ml的灭菌MH培养基中，充分混匀后置于恒温水浴摇床37℃振荡培养24h，将培养液加到离心管中置于离心机上5000rpm离心5分钟，将菌沉淀与上清液（菌悬液）分离。向20ml上清液中加入200μl的0.1M的硝酸银溶液，使银离子的浓度为1mM，置于水浴摇床上37℃振荡反应24h，然后振荡后的溶液在冰浴条件下进行超声破碎，输出功率为150瓦特，超声30s，间歇30s，重复6次。将超声后的溶液用0.22μm的滤膜过滤，得到澄清的纳米银溶液。该纳米银溶液的电镜图如图1所示，从图1可以看出，本实施例的纳米银溶液确实为纳米银溶液。

实施例2：

将金黄色葡萄球菌接种到100ml的灭菌MH培养基中，充分混匀后置于恒温水浴摇床37℃振荡培养24h，将培养液加到离心管中置于离心机上5000rpm离心5分钟，将菌沉淀与上清液（菌悬液）分离。向20ml上清液中加入1ml的0.1M的硝酸银溶液，使银离子的浓度为5mM，置于水浴摇床上37℃振荡反应24h，然后振荡后的溶液在冰浴条件下进行超声破碎，输出功率为200瓦特，超声30s，间歇30s，重复6次。将超声后的溶液用0.22μm的滤膜过滤，得到澄清的纳米银溶液。该纳米银溶液的电镜图如图2所示，从图2可以看出，本实施例的纳米银溶液确实为纳米银溶液。

实施例3：