[发明专利]一种猪伪狂犬病病毒变异株PRV-ZJ01及应用

说明书

技术领域    

本发明涉及猪伪狂犬病毒技术领域，特别涉及一种猪伪狂犬病毒变异株PRV-ZJ01，还涉及猪伪狂犬病毒变异株PRV-ZJ01的应用。

背景技术   

伪狂犬病毒（PRV）属于疱疹病毒科甲型疱疹病毒亚科成员，可引起新生仔猪中枢神经系统紊乱，生长猪呼吸道症状，并能导致妊娠母猪流产、死胎与弱仔。美国与部分欧洲国家已宣布消灭和根除该病。我国广泛使用该病基因缺失弱毒疫苗有效控制并逐步净化。但是，自2011年底起，我国很多该病免疫猪场相继出现仔猪呕吐和神经症状、生长猪出现呼吸道症状，死亡率明显增高，妊娠母猪出现流产、死胎、弱仔等，造成严重经济损失，但对流行毒株的致病性和抗原性均不清楚。

发明内容   

为了解决以上现有技术中存在的疫情不能得到有效控制的问题，本发明提供了一种猪伪狂犬病毒变异株PRV-ZJ01。

本发明还提供了所述猪伪狂犬病毒变异株PRV-ZJ01在制备免疫疫苗的应用。

本发明是通过以下步骤得到的：

一种猪伪狂犬病病毒变异株PRV-ZJ01，其保藏号为CGMCC No.8170。采用10^6.0TCID₅₀滴鼻感染85日龄健康猪，非免疫猪全部发病和死亡。

所述的猪伪狂犬病病毒变异株PRV-ZJ01在制备疫苗中的应用。

优选所述疫苗为水溶性灭活疫苗。

疫苗的制备过程为：取PRV-ZJ01病毒液灭活，加入卡波姆佐剂混合均匀即得。病毒液中病毒含量为10^7.0TCID₅₀/mL。

疫苗中病毒抗原含量大于10^6.0TCID₅₀/mL。

本研究采集我国某发病猪群患病仔猪脑组织病料，无菌处理后接种BHK21细胞，盲传2代，培养2~3天出现明显细胞病变，病毒空斑纯化3次后连续传代15次，均出现相同病变，病毒TCID₅₀为10^-7.5/mL，PCR鉴定为PRV，命名为PRV-ZJ01毒株。病毒gE和gB基因序列测定结果显示其与其他已公布的毒株序列同源性分别为97.1%~99.6%和98.1%~99.5%，其gE基因推导的氨基酸序列在第54和448位发生D-I和V-I突变，第496位插入D。采用10头24日龄仔猪进行人工感染发病试验，结果显示，该分离株可引起PRV典型临床症状和病理变化，100%死亡。采用24头85日龄健康育肥猪滴鼻接种10^2 .0TCID₅₀ ~10^6.0 TCID₅₀ PRV-ZJ01株病毒液，结果为，攻毒组猪均出现发热，精神沉郁，呕吐，咳嗽，呼吸困难和神经症状等典型症状，10^6.0 TCID₅₀病毒感染组猪在攻毒后7天内全部死亡，病毒LD₅₀为10^3.13 TCID₅₀/mL。该毒株与50份Bartha-K61、Bucharest、HB-98疫苗毒株血清及其抗血清交叉中和试验，结果显示，该分离毒株抗原发生明显变异，变异系数R值为0.378~0.448，首次证明PRV-ZJ01毒株为PRV超强毒抗原变异毒株，属于血清2亚型超强毒株。

本发明的有益效果：采用PRV-ZJ01株病毒液（10^6.0TCID₅₀/mL）制成水包油型灭活疫苗，与Bartha-K61活疫苗进行猪体免疫保护试验，结果表明，ZJ01毒株灭活疫苗安全性较好，免疫保护效率明显高于Bartha-K61活疫苗免疫组，Bartha-K61活疫苗对ZJ01超强毒株不能提供完全保护。证明该病毒株具有较好免疫原性，可用于该病疫苗和诊断方法研究与开发。

菌株保藏信息

保藏时间：2013年9月18日，

保藏单位：中国微生物菌株保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），

保藏编号：CGMCC No.8170，

保藏单位地址：中国科学院微生物研究所，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，

分类命名：猪伪狂犬病毒。

附图说明