[发明专利]一种固定牡蛎远缘杂种回交优势的育种方法

说明书

技术领域：

本发明属于海洋农业技术中的牡蛎遗传育种领域，具体涉及一种固定牡蛎远缘杂种回交优势的育种方法。

背景技术：

远缘回交（Distant backcross），是指利用可育的杂种F1与亲本种间的轮回杂交，是杂交育种中一种重要的遗传改良手段（张天真,2005）。它可以有效的打破目标基因与不利基因连锁，增加重组频率，提高异源种质渐渗，控制超亲分离，增强杂种育性，从而创造优良重组类型。目前，远缘回交多见于作物育种中，大多会获得比较理想的遗传改良效果（盖钧镒，2006，尤其在作物上的应用比较广泛，如马铃薯（Vallejos&Tanksley,1983）、水稻（Causse et al.,1994）、番茄（Bernacchi&Tanksley,1997）、亚麻（Li et al.,2004）等。

对于水产动物而言，远缘回交主要集中在鱼类育种上，如鲤鲫（楼允东,1999;刘少军,2010）、鲫鲂（覃钦博,2010;宋灿等,2012）、罗非鱼（Bezault et al.,2012）、牙鲆等（Sui et al.,2011），这些研究均获得明显的遗传改良效果。此外，学者们开展了几种海胆的种间杂交，并且利用可育杂种与亲本种进行了种间回交受精实验，发现杂种与亲本种间具有良好的配子亲和性（常亚青等,2004;Rahman&Uehara,2002;Ding et al.,2007）。由于大部分贝类种间的天然杂交不易发生，且杂种大多难于培养，所以，远缘回交报道较少（Gaffney&Allen,1993;Allen et al.,1993）。学者们发现了天然回交的贻贝（Toro et al.,2002;Comesana et al.,1999;Brannock&Hilbish,2010）和鲍鱼（Brown,1995;柯才焕等,2000;Ahmed et al.,2008;Luo et al.,2010），并且研究了他们的遗传渐渗机制。

至于牡蛎，Camara et al.,（2008）利用1个长牡蛎（Crassostrea gigas）与熊本牡蛎（C.sikamea）自然杂种的雌性个体与其雄性双亲的回交受精实验，但该研究至D形幼虫就终止了。申请人发现，香港牡蛎（C.hongkongensis）与长牡蛎可以杂交，而且存在单向受精，即香港牡蛎的卵子可以与长牡蛎精子受精，反之不能受精；而且在适宜的环境条件下可以培育出大量的种间杂交稚贝（张跃环等，2012）。杂种不具有生长优势，而且高度不育，尤其是雄性个体大部分以精母细胞形式存在，仅有很少量个体的精母细胞可以转化为精子。在此基础上，利用少量可育的杂种配子与双亲进行回交，结果发现杂种与双亲间具有较高受精率，不存在生殖障碍，而且回交子代表现出回交优势（张跃环，2012）。

发明内容：

本发明的目的是克服传统牡蛎育种周期长，效果显著性差等缺陷，提供一种能够缩短育种年限，有效固定牡蛎远缘杂种回交生长优势的育种方法。

本发明的固定牡蛎远缘杂种回交优势的育种方法，其特征在于，包括以下步骤：

（a）远缘杂种回交子代上选：利用牡蛎远缘杂种回交中具有明显生长优势的回交组合为材料，以双亲及回交子一代BC1F1_C为对照，按照10-15%比例，以鲜重为指标，上选回交子一代BC1F1，获得表型性状上选群体BC1F1_P；

（b）分子标记筛选：对步骤（a）已选出的表型性状上选群体BC1F1_P进行分子标记筛选，从中筛选基因型相对一致、鲜重最大的3-5%部分个体作为繁殖群体进行培育，得到双优型群体BC1F1_G；该群体具有表型性状好、基因型相对一致等优点（BC1F1_G双优型群体）

（c）双优型群体自繁：利用步骤（b）中已经选出的双优型群体BC1F1_G作为亲本，进行自繁，以双亲及回交F1自繁子二代BC1F2_C对照，获得具有显著回交优势的自繁子二代BC1F2_G；

（d）双优型子代纯化：重复步骤（c），进行双优型子代连续自繁，直到生长性状稳定遗传为止，从而固定牡蛎回交子代的生长优势。

通过以上步骤，经过2～3代的双优型子代优化，可以纯化异源导入的控制快速生长的相关基因。由于结合了分子标记筛选，明显的缩短了育种年限，并最终使得显著生长优势这一表型性状得到稳定表达。