[发明专利]树葡萄组培苗快速繁殖的海绵液体培养基及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及植物组培苗快繁领域，具体涉及树葡萄组培苗快速繁殖的海绵液体培养基及其应用。

背景技术

目前，树葡萄的组培多采用简单液体培养基+固体培养基的操作模式，但此种培养方式效率较低，增殖率低，且树葡萄组培苗植株的品质不高，其中所用培养基成本较高。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种可提高树葡萄组培增殖率海绵液体培养基。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：树葡萄组培苗快速繁殖的海绵液体培养基，是选择圆柱形的耐高温过滤海绵，直径与透气盖螺纹瓶底部大小一致，海绵厚度为1cm，在海绵上面均匀开有15个口径为0.8cm，深度为0.5cm大小的V形孔，将海绵块平放在培养瓶底部，开孔的一面朝上，直接用自来水配制药品并经定容调好PH值即成液体培养基，适量分装到放有海绵的培养瓶中，使营养液刚刚侵泡完海绵块即可；所述液体培养基为1/2MS培养基。

本发明的第二个目的是提供了上述海绵液体培养基在树葡萄组培苗快速繁殖中的应用。

进一步的，上述的应用，包括以下步骤：

1）将上述的的分装好的海绵液体培养基经高压灭菌，灭菌温度为121-123℃，灭菌压力为0.11-0.13MP，灭菌时间为22-25分钟，得到灭菌后培养基；

2）培养材料的接种：无菌状态下，将树葡萄培养材料分切成单芽分别插种到灭菌后的海绵液体培养基的V形孔中，进行快速增殖培养，培养时间为30-35天，增殖率为5-6倍；

3）增殖材料的转接：将步骤2）中增殖后的材料挟出分切再接种到新鲜的液体培养基中继续进行增殖培养；此后当培养到30-35天时，再次将材料进行分切更换到新鲜的液体培养基中进行增殖培养；

4）生根培养：将步骤3）得到的增殖培养后的树葡萄增殖材料转接到一定数量后，将其分切成单株转接到添加有琼脂粉的固体培养基中进行生根培养，经过2～3个月培养炼苗后即得到树葡萄组培苗移植株。

本发明的有益效果为：本发明提供的海绵液体培养基，具有以下优点：

1、树葡萄组培材料能充分吸收到营养成份，提高品质及产量，增殖率可达5-6倍；

2、海绵可重复利用，且液体培养基分装配制比较方便，瓶子等用具容易清洗干净；

3、省去购买琼脂粉的费用，降低生产成本。

具体实施方式

实施例1：

（一）海绵液体培养基的制作：

选择圆柱形的耐高温过滤海绵，直径与透气盖螺纹瓶底部大小一致，海绵厚度为1cm即可，在海绵上面均匀开有15个口径为0.8cm，深度为0.5cm大小的V形孔，将海绵块平放在培养瓶底部，开孔的一面朝上。因不加琼脂粉，可直接用自来水配制药品并经定容调好PH值即成液体培养基，最后适量分装到放有海绵的培养瓶中，使营养液刚刚侵泡完海绵块即可；

（二）培养基的灭菌：

由于选用的海绵为耐高温材料，主要成分为聚氨酯，具有抗腐蚀、无毒副作用、耐高温（可达200℃）、强度高（回弹性好）、吸水性极强，可回收利用等优点，经过多次高压灭菌后不变型仍可重复使用；分装好的培养基经高压灭菌（灭菌温度为121-123度，压力为0.11-0.13MP，时间为22-25分钟），最后将灭菌好的液体培养基放到培养基储藏室备用；

（三）培养材料的接种：

在无菌工作台上将培养材料分切成单芽分别插种到海绵液体培养基的V形孔中，由于海绵有很好的回弹性和吸水性，对插在V形孔中的培养材料有一定的固定作用和保湿功能，利于培养物的生长和养分的吸收；

（四）培养材料的增殖培养：

培养在海绵液体培养基上的材料，由于液体培养基中分子或离子运动较快，其基部能够充分接触到营养液并能较好的吸收养分，同时也将自身切口分泌出来的醌类有害物质稀释到液体培养基中，减少褐化的产生，从而达到快速增殖的效果，一般培养30-35天后增殖率可达到5-6倍；

(五) 增殖材料的转接：

当增殖材料在液体培养基中培养30-35天后，培养材料不断地增殖生长，已经吸收了大部分的营养成份和水分，同时液体培养基中也积累了一定的醌类等有害成分；此时应将增殖后的材料挟出分切再接种到新鲜的液体培养基中继续进行增殖培养，此后当培养到30-35天时，不断地将材料进行分切更换到新鲜的液体培养基中进行增殖培养，即可使生产达到一定数量和规模的材料；

（六）生根培养：