[发明专利]一种检测己烯雌酚的电化学免疫传感器的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于纳米材料和食品添加剂，提供了一种检测己烯雌酚的电化学免疫传感器，可以用于食品中己烯雌酚的检测。

背景技术

己烯雌酚(DES)是一种合成的非甾体类激素，广泛用于临床医学和作为动物生长促进剂。近来，许多研究表明己烯雌酚是一种潜在的致癌物质，在美国和许多欧盟国家，己烯雌酚被禁止用于促进动物生长等方面。因此，建立一种快速、灵敏的，简单的检测方法是非常有必要的，目前报道的检测己烯雌酚的方法主要包括气相色谱-质谱分析法、化学反光发和加压毛细管电色谱非法等，这些方法往往需要复杂的处理步骤，并且一起操作复杂，检测时间较长。

发明内容

本研究实现了一种利用免疫反应结合电化学检测食品中的己烯雌酚的方法，具有灵敏度高，操作简单及成本低廉等优势。通过在金电极表面修饰一层纳米复合物，用来放大传感器的电信号，然后在将己烯雌酚完全抗原修饰在电极表面，通过其和己烯雌酚的标准品竞争结合被标记的抗体复合物，这样结合在电极表面的抗体复合物上的酶就可以催化底物产生电信号。利用电信号变化和己烯雌酚标准品浓度之间的关系，绘制工作曲线，这样就可以达到检测己烯雌酚含量的目的。

发明内容

本发明的内容之一是提供了一种检测食品中己烯雌酚的电化学免疫传感器的制备方法。

本发明的内容之二是将构建的免疫传感器，用于检测食品中的己烯雌酚。

本发明的技术方案，包括以下步骤：

1、一种检测食品中己烯雌酚的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤;

(1) 碳纳米管-离子液体-壳聚糖纳米复合物(MWCNTs-IL-CS)和金纳米粒子的制备：

50 mg的壳聚糖溶于 20 ml的1%的乙酸中，得到壳聚糖溶于，一定量的碳纳米管和粒子通过超声溶于得到的壳聚糖溶液中，得到MWCNTs-IL-CS。

取1 ml，1%的HAuCl₄·4H₂O溶于99 ml水中，加入一定量的柠檬酸钠溶液，100℃回流1 h，得到AuNPs纳米粒子。

(2) 抗体复合物的制备：

10 mg DA和1 mg GO 溶于 10 ml pH为8.5的PBS中，超声2 min，形成均匀的分散溶。60℃搅拌24 h，得到PRGO，重新溶于10 ml水中；500 μl HAuCl₄·4H₂O (10 mg/mL)加如上述得到的溶液中，搅拌2 h后，再加入一定量的柠檬酸钠溶液，搅拌2 h，离心清洗，再溶于10 ml水中；最后，100 μl，1 mg/mL的HRP 和100 μl，5 μg/mL的Ab加入到2 ml上述溶液中，4℃搅拌一夜，用PBS缓冲液离心清洗，溶于2 ml含有1%BSA的PBS中备用。

(3) 检测己烯雌酚免疫传感器的制备：

滴加10μl的MWCNTs-IL-CS在处理好的金电极表面，室温下干燥；再滴加20μl的AuNPs在修饰的电极表面，室温下干燥；滴加一定量的己烯雌酚完全抗原DES-BSA在修饰电极表面，室温下干燥，每一步修饰后用PBS缓冲溶液清洗电极。

如上所述制备的一种检测己烯雌酚的电化学免疫传感器，用于检测己烯雌酚的步骤如下：

(1)以Ag/AgCl电极为参比电极，铂丝电极为对电极，在修饰电极表面同时滴加己烯雌酚标准品和抗体复合物并作为工作电极，连接电化学工作站，在含有H₂O₂和HQ的PBS底液中，通过循环伏安法检测，扫描电压是0.6—-0.6 V，检测添加H₂O₂前后电化学信号的变化和己烯雌酚标准品浓度之间的关系，绘制工作曲线；

(2) 将待测物代替己烯雌酚标准品，按照工作曲线的方法进行检测。

所述的一种检测己烯雌酚的电化学免疫传感器，所用材料均在化学试剂公司购买。

本发明体现的优势和特点是：

(1)    本发明采用的MWCNTs-IL-CS复合物导电能力强，生物相容性好，成为构建电化学免疫传感器的优良材料；

(2)    本发明制备的传感器灵敏度高、检测速度快、操作简单；

(3)    本发明检测己烯雌酚的方法，操作简单、快速，便于实际检测。

具体实施方式