[发明专利]转基因油菜籽MS8品系的LAMP检测试剂及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及转基因油菜籽的检测，具体涉及转基因油菜籽MS8品系的LAMP检测试剂及检测方法。

背景技术

转基因食品在全世界一直就是极具争议性的问题。它对人的身体健康、自然环境和生态圈的影响，至今没有确定结论，其潜在的巨大风险却不可忽视。从1990年起，欧盟已先后颁布了10多项有关转基因生物安全性管理方面的法规，逐步形成了总体一般性法规与专项法规相配套的法律体系，要求对转基因作物的生产加以控制并加强管理。我国也颁布了《农业转基因生物安全管理条例》和《农业转基因生物标识管理办法》，并于2002年3月20日正式实施。对油菜籽等转基因产品的定性检测研究已取得成功，主要方法是快速检测试纸条法、PCR、ELISA等，每种方法都有其优缺点,如公开号为CN1420181的发明专利申请，就公开了用于转基因油菜籽实时荧光PCR检测的探针及试剂盒，但未对转基因油菜籽MS8可以实时检测的说明。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种对转基因油菜籽MS8品系具有特异性高、检测周期短、成本低廉和操作简单的LAMP检测试剂及检测方法。

本发明系选择参考参考GenBank中油菜籽MS8的基因序列。根据油菜籽内源基因左端与外源基因右端的边界位置，使用Primer Exploer V4（http://primer exlorer.jp）设计并筛选出1组特异性好、灵敏性高的特异性引物，引物均由上海英潍捷基生物技术有限公司合成。

本发明的转基因油菜籽MS8品系的LAMP检测试剂，包括2×LAMP反应缓冲液、Bst DNA聚合酶和特异性引物，所述特异性引物的核苷酸序列分别为：

F3：TCGAATCATA TTCGTACTGT AGT

B3：AAAACCTCTC TTTGTAGAAA CA

FIP：GCCACTCGAA GGACAAATTT TAAAATTTTT ATGATCAAAG CGTCCTCA

BIP：AAGTGTCAAA CTCTCATCCA AACATTTTAT GCCATTTAGT TAACTAGTTG A

LF：TGCTGTGGCC CATAAACCT。

利用上述转基因油菜籽MS8品系的LAMP检测试剂检测转基因油菜籽MS8品系的方法，步骤如下：

A、DNA提取：油菜籽样品粉末用DNA提取试剂盒提取，得到DNA模板，具体依DNA提取试剂盒说明书进行；

B、LAMP检测：25μL反应体系为2×LAMP反应缓冲液12.5μL，浓度为8U/μLBst DNA聚合酶1.5μL，浓度都为20μmol/L的引物F3和B3各为0.2μL，浓度为20μmol/L的引物LF为0.8μL，浓度都为20μmol/L的引物BIP和FIP各为1.6μL，DNA模板2.0μL，余量为双蒸水；LAMP反应条件为反应管在61℃恒温水浴锅中扩增1h，扩增结束后，8000r/min室温离心1min，染色剂SYBR Green I与扩增产物充分混合，反应管内颜色若变为绿色，则为转基因油菜籽MS8品系。

本发明的转基因油菜籽MS8品系的LAMP检测试剂及检测方法，以外引物F3和B3，内引物FIP和BIP，环引物LF为扩增靶序列，具有特异、敏感的优点；检测限可达到65.12ng/μL，并且具有良好的特异性。检测方法通过DNA提取和LAMP检测，反应管内颜色若变为绿色，则为转基因油菜籽MS8品系，对DNA模板质量要求不高，LAMP检测周期短，检测成本低，对技术人员的要求较低，操作过程简单，结果分析简单。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1、转基因油菜籽MS8品系的LAMP检测试剂

以25μL反应体系：2×LAMP反应缓冲液12.5μL，浓度8U/μL的Bst DNA聚合酶1.5μL，浓度都为20μmol/L的引物F3和B3各为0.2μL，浓度为20μmol/L的引物LF为0.8μL，浓度都为20μmol/L的引物BIP和FIP各为1.6μL。LAMP反应缓冲液和BstDNA聚合酶购于NEW ENGLAND Biolabs公司。

实施例2、DNA提取