[发明专利]一种用于诱导表达锌指核酸酶的载体及其应用

权利要求书

1.用于诱导表达作用于靶基因的锌指核酸酶环形载体，含有大肠杆菌复制起始区、氨苄青霉素抗性基因，以及表达盒1、表达盒2、表达盒3和表达盒4；

所述表达盒1从上游到下游依次包括如下元件：P_CMV IE、Puro^r和SV40polyA；所述表达盒2从上游到下游依次包括如下元件：P_CMV、rtTA-Advanced和SV40polyA；所述表达盒3从上游到下游依次包括如下元件：TRE_mod、P_minCMV、DNA片段1和SV40polyA；所述表达盒4从上游到下游依次包括如下元件：TRE_mod、P_minCMV、DNA片段2和SV40polyA；

所述DNA片段1和所述DNA片段2满足如下条件：所述DNA片段1编码的蛋白和所述DNA片段2编码的蛋白均含有能够与所述靶基因特异性结合的锌指结构域，以及能够切割所述靶基因的Fol kⅠ结构域。

2.根据权利要求1所述的环形载体，其特征在于：所述大肠杆菌复制起始区的序列为序列表中序列1的第8632-9231位；所述氨苄青霉素抗性基因的序列为序列表中序列1的第10323-9393位；和/或

在所述表达盒1中，所述P_CMV IE的序列如序列表中序列1的第4196-4697位所示；所述Puro^r的序列如序列表中序列1的第4810-5406位所示；所述SV40polyA的序列如序列表中序列1的第5673-5723位所示；和/或

在所述表达盒2中，所述P_CMV的序列如序列表中序列1的第8083-7502位所示；所述rtTA-Advanced的序列如序列表中序列1的第7394-6648位所示；所述SV40polyA的序列如序列表中序列1的第6625-6192位所示；和/或

在所述表达盒3中，所述TRE_mod的序列如序列表中序列1的第1979-1730位所示；所述P_minCMV的序列如序列表中序列1的第1727-1659位所示；所述SV40polyA的序列如序列表中序列1的第458-265位所示；和/或

在所述表达盒4中，所述TRE_mod的序列如序列表中序列1的第1730-1979位所示；所述P_minCMV的序列如序列表中序列1的第1985-2044位所示；所述SV40polyA的序列如序列表中序列1的第3377-3577位所示。

3.根据权利要求1或2所述的环形载体，其特征在于：所述DNA片段1的序列如序列表中序列2所示；所述DNA片段2的序列如序列表中序列3所示。

4.根据权利要求1-3中任一所述的环形载体，其特征在于：所述表达盒1的核苷酸序列为序列表中序列1的第4196-5723位；和/或

所述表达盒2的核苷酸序列为序列表中序列1的第8083-6192位；和/或

所述表达盒3的核苷酸序列为序列表中序列1的第1979-265位；和/或

所述表达盒4的核苷酸序列为序列表中序列1的第1730-3577位。

5.根据权利要求1-4中任一所述的环形载体，其特征在于：所述环形载体的核苷酸序列为序列表中序列1。