[发明专利]一种抗肿瘤化合物Chondrosterin J及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及药物化合物制备领域，具体涉及一种抗肿瘤化合物Chondrosterin J及其制备方法与应用。

背景技术

恶性肿瘤是一种严重危害人类生命健康的常见病，已成为仅次于心脑血管病的第二位死因。据世卫组织在2010年披露的数据，目前全球平均每8个死亡病例中就有1人死于恶性肿瘤，在2010年，全球有760万人死于肿瘤，有超过1200万人被诊断患有肿瘤。肿瘤发病率还在逐年增加，预计至2020年，将有2000万新发肿瘤病例，死亡人数将达1200万。寻找和开发高效低毒的抗肿瘤药物仍然是目前攻克肿瘤的主要途径。

天然药物是人类预防和治疗疾病的重要物质来源，目前国际上临床广泛应用的化学药物，其一半左右来源于天然化合物及其衍生物或类似物。陆生药源由于经过人类长期的研究开发，新药源日渐减少，而海洋中生活着种类繁多的生物，蕴藏着大量的生物活性物质。我们近年开展了南海海洋生物的共附生真菌及其活性物质研究，发现海洋生物共附生真菌的菌株资源非常丰富，而且从中发现活性物质的几率很高。例如，海洋真菌Trichodermasp.能产生新结构的、对MCF-7、LoVo、Bel-7402、A549、CNE1、CNE2、KB、SUN1等有明显活性的缩酮类化合物；南海扭曲肉芝软珊瑚Sarcophyton tortuosum中分离得到的真菌Chondrostereum sp.经发酵培养，能产生Hirsutanol A、Chondrosterin A、Incarnal等新结构的化合物，该类化合物属于Hirsutane型倍半萜，它们对多种肿瘤细胞均具有显著抑制活性，药用前景明显。Hirsutane型倍半萜类化合物属于萜类化合物的一种，它具有独特的线型三并五元环结构。从1967年至今近50年时间里发现的该类化合物仅30余个，它们的结构丰富多样性体现在不饱和键的数量和位置不同、碳架重排、或者某些官能团的氧化。大多数Hirsutane型倍半萜是从担子菌的次生代谢物中分离得到，有些具有很强的抗菌、抗虫和细胞毒性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种海洋真菌新的代谢产物Chondrosterin J及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明所述的化合物Chondrosterin J，是具有Hirsutane骨架结构的、新的倍半萜化合物，是海洋真菌Chondrostereum sp.的一个重要代谢产物。

所述化合物Chondrosterin J的结构式为：

                                                 

式（Ⅰ）。

本发明的化合物Chondrosterin J 可以从真菌，例如南海海洋软珊瑚Sarcophyton tortuosum的内生真菌Chondrostereum sp.的发酵培养液中提取分离而得到。

本发明化合物Chondrosterin J由真菌Chondrostereum sp.发酵制备方法包括以下步骤：

 S1. 海洋真菌Chondrostereum sp.的菌种培养：选用PD (potato dextrose) 培养基，其培养基组成为：土豆 200 g的水煮液，葡萄糖 20 g，海水 1 L；挑取菌株接入该液体培养基中，25～28℃培养5～15天。

S2. 海洋真菌Chondrostereum sp.的发酵培养：甘油发酵培养基成分配比按重量比为：甘油1～40 g，蛋白胨1～15 g，酵母膏1～10 g，CaCO₃ 0.5～5 g，海水1 L或者是含有15～40 g粗海盐自来水1L，pH 7.5。将在PD培养基中培养好的菌丝体无菌转接入该甘油发酵培养基，于室温15～35 ℃静置或者是摇床50～300转/分摇瓶培养10～40天。

S3. 将上述培养好的发酵液过滤，滤除菌体，收集发酵液；发酵液用乙酸乙酯、正丁醇或氯仿等有机溶剂进行提取，合并提取液，浓缩得到总提取物；将上述总提取物在硅胶柱中进行色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇梯度淋洗；收集石油醚-乙酸乙酯（2：1）得到的洗脱组分，经高效液相色谱，以乙腈-水（60：40）纯化得到化合物Chondrosterin J。