[发明专利]一株不利用精氨酸且不积累瓜氨酸的嗜盐四联球菌

说明书

技术领域

本发明涉及一株不利用精氨酸且不积累瓜氨酸的嗜盐四联球菌，属于微生物领域。

背景技术

氨基甲酸乙酯（Ethyl carbamate,EC）是一种致癌物质，主要会引发肺癌、肝癌等严重性肿瘤疾病，并且对人体的免疫系统造成伤害。研究发现，不仅酒类中含有氨基甲酸乙酯，而且在大豆发酵制品如酱油中同样不同程度的含有此类物质。

酿造酱油中氨基甲酸乙酯的主要前体物质是瓜氨酸与乙醇。因此降低酱油中瓜氨酸的含量是我们降低酱油中氨基甲酸乙酯有效措施之一。

在酱油生产中，酵母产生乙醇，一大类厌氧或兼性厌氧的乳酸菌可以把精氨酸通过精氨酸脱亚氨基途径（ADI途径）转化成瓜氨酸。ADI途径主要由三个基因控制，arcA基因，arcB基因，arcC基因。具体反应如下面的反应式所示。

酱醪中的主要微生物有乳酸足球菌，嗜盐四联球菌，魏斯氏菌，链球菌，葡萄球菌，乳酸菌。乳酸菌是酱油生产过程中的优势菌株，也是香味物质产生菌，但也是瓜氨酸积累量很高的菌株。

本发明旨在筛选一株不能利用精氨酸且不产瓜氨酸的乳酸菌，从而降低酱油中氨基甲酸乙酯的含量。

发明内容

本发明提供了一株嗜盐四联球菌（Tetragenococcus halophilus）BBE C3，已于2013年10月20日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏地址是中国武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M2013479。

T.halophilus BBE C3在高盐环境下不利用精氨酸且不积累瓜氨酸。

所述嗜盐四联球菌分离自传统酱油工艺的酱醪，其保藏条件如下：从生长良好的平板上挑取单菌落转接入含100g/lNacl的MRS培养基中，在30℃静置培养四天，取500μL培养液移入含有500μL30%甘油的保藏管中，置于-80℃冰箱保存。

所述MRS培养基为培养乳酸杆菌专用，购于OXIOD公司。

嗜盐四联球菌分离培养基为改良MRS培养基：100g/l NaCl,溴甲酚紫0.06g/l，50u/ml制霉菌素，100g/l生酱油；30℃，5-7天。

氨基酸检测培养基：酵母膏5g/l，牛肉膏5g/l，胰蛋白胨5g/l，NaCl180g/l，葡萄糖0.5g/l，Tween-801g/l，MgSO₄·7H₂O0.2g/l，MnSO₄·H₂O0.05g/l，FeSO₄0.4g/l，柠檬酸三胺2g/l，CaCO₃0.1g/l，吡哆醛-5-磷酸0.05g/l，K₂HPO₄2g/l，pH6.0，根据检测需要添加相应氨基酸。

将保藏的所述嗜盐四联球菌在含100g/l NaCl的MRS固体培养基上划线，于30℃静置培养4天，挑取单菌落接入含100g/l NaCl的MRS液体培养基，30℃静置培养四天，离心10min（6000rpm，4℃）后去上清，用磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.0）悬浮菌体。向5mL离心管中加入4mL含5g/L精氨酸的氨基酸检测培养基，接种400μL的悬浮菌液，接种后OD₆₀₀为10.0；30℃静置培养5天后精氨酸没有消耗，瓜氨酸生成量为0，鸟氨酸无积累。

向5mL离心管中加入4mL含3g/L瓜氨酸的氨基酸检测培养基，接种400μL的悬浮菌液；30℃静置培养5天后瓜氨酸部分转化成鸟氨酸。因此，在高盐条件下这株嗜盐四联球菌不利用精氨酸产生瓜氨酸。

本发明的有益效果是找到一株不利于精氨酸且不会积累氨基甲酸乙酯的前体物瓜氨酸的嗜盐四联球菌，在降低发酵食品中氨基甲酸乙酯含量方面有很大的潜在应用价值。

生物材料保藏

嗜盐四联球菌（Tetragenococcus halophilus）BBE C3，已于2013年10月20日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），中国武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M2013479。

具体实施方式

分离平板：改良MRS(100g/l NaCl,溴甲酚紫0.06g/l，50u/ml制霉菌素，100g/l生酱油，琼脂20g/l)。

培养条件：30℃，5-7天。