[发明专利]纳米胶乳增强免疫比浊法测定脂联素的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医学免疫体外诊断领域，具体涉及一种采用纳米胶乳增强免疫比浊法测定人体血清中脂联素的试剂盒。 

背景技术

脂联素 (Adiponectin，APN) 亦称 Acrp30、GBP28 或 AdipoQ，是一种由脂肪细胞合成和分泌细胞因子，能在人体血浆中稳定存在，浓度范围约为 3.0～30.0mg/L，约占血浆蛋白 的 0.01％。人类脂联素含244个氨基酸，包括3个区域：氨基末端信号序列、胶原结构域和羧基末端的球形结构域。脂联素以三聚体（65kb）、六聚体（150kb）和高分子量聚合体（18-36个多体，>280kb）三种亚型存在于血液中。临床研究显示，脂联素与肥胖、II型糖尿病、冠心病、胰岛素抵抗密切相关，具有抗动脉粥样硬化形成、抗炎症和血管损伤后抗内膜增生的特性。 

脂联素的测定方法有多种，例如放射免疫法（RIA）、酶联免疫吸附法（ELISA）（人脂联素ELISA试剂盒，CN102517256A）。ELISA方法虽然在临床上使用了近二十年，但它依然存在一些致命缺点，操作时间长、自动化程度低。放射免疫法（RIA）灵敏度高，但不稳定，重复性比ELISA差，而且存在放射性污染的危险。 

纳米胶乳增强免疫比浊法（Latex-enhanced turbidimetric immunoassay）是一种体液蛋白均相透射免疫比浊检测方法，原理是在纳米级高分子胶乳微球的表面交联多克隆抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应液的透光性能；反应液透光性能（即吸光度）的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性，在一定范围内可以反映被测抗原的浓度。纳米胶乳增强免疫比浊法的优势具体体现在：①省时省力：在均相反应体系中进行抗原、抗体反应，利用全自动生化分析仪直接测定反应液的吸光度值，几分钟就能获得结果，省却了ELISA法反复孵育和洗板等烦琐操作步骤。②稳定准确：操作步骤的简化也相应地避免了许多人为操作因素和试剂、环境等外界因素的干扰，稳定性和重复性都较好，能较真实地反映被测人类血清中脂联素的含量。③应用广泛：免疫比浊法的灵敏度虽然比ELISA法差一些，但足以检测到人类血清中脂联素的下限值，可完全满足临床检测要求。 

发明内容

本发明的目的是提供一种纳米胶乳增强免疫比浊法检测脂联素的试剂盒。 

纳米胶乳增强免疫比浊法的原理是在纳米级高分子胶乳微球的表面交联多克隆抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应液的透光性能；反应液透光性能（即吸光度）的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性，在一定范围内可以反映被测抗原的浓度。具有操作简单、快速准确、灵敏度高、特异性强的特点，而且检测成本低，可用于门诊体检检测，适用于全自动或半自动生化分析仪。 

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案： 

一种纳米胶乳增强免疫比浊法测定脂联素的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含包被抗人脂联素多克隆抗体的胶乳颗粒，所述胶乳颗粒的表面存在羧基基团，粒径为80～100nm，为苯乙烯和丙烯酸的共聚物；所述抗人脂联素多克隆抗体与胶乳颗粒是通过化学键联方式结合。

进一步地，本发明的试剂盒包括R1试剂，R2试剂和脂联素抗原校准品溶液，其中： 

所述R1试剂包含电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂和缓冲液；

所述R2试剂包含包被抗人脂联素多克隆抗体的胶乳颗粒、电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、缓冲液；

所述脂联素抗原校准品溶液包含脂联素和稳定剂。

所述胶乳颗粒是含有至少苯乙烯作为单体的共聚物，并且特别优选为苯乙烯和丙烯酸的共聚物，表面含有丰富的羧基基团。乳胶颗粒胶乳颗粒的粒径范围为80～100nm。 

所述胶乳颗粒的制备方法是：将苯乙烯、丙烯酸、表面活性剂分散或溶于去离子水中，在氮气环境下缓慢添加引发剂，于约80℃搅拌反应2～4h，冷却，得到胶乳颗粒。 

所述苯乙烯与丙烯酸的质量比优选为5:1。所述丙烯酸单体可以替换为等摩尔量的甲基丙烯酸等其他丙烯酸类单体。 

所述表面活性剂选自十二烷基苯磺酸钠、二辛基琥珀酸磺酸钠等。 

所述引发剂选自过氧化物、过氧酯或偶氮化合物，例如过硫酸钾、过氧化苯甲酸叔丁酯、过氧化叔戊酸叔丁基酯、偶氮二异丁腈等。 

所得的乳胶颗粒为纳米级乳胶颗粒，具有如下特征： 

平均粒径（Mean Diameter）：80～100nm

聚合物（Polymer）：p（S/13%AA）