[发明专利]一种耐高温碱性木聚糖酶

权利要求书

1.一种耐高温碱性木聚糖酶，其特征在于，所述木聚糖酶的酶学性质如下：

（1）温度：适用温度范围为40-75℃，最适反应温度65℃，在75℃酶活完全稳定；

（2）pH：该酶适用反应pH值范围为5.0-11.0，在pH值为11.0时酶活完全稳定，最适反应pH值为10.0；

（3）酶活性：发酵液碱性木聚糖酶酶比活力为350-420IU/ml；

（4）热稳定性：该酶在70℃条件下保存1h后仍能保持80%以上酶活，75℃条件下保存1h后保持70%以上酶活；

（5）存储稳定性：该酶在室温下保存12个月后酶活损失小于3.0%。

2.如权利要求1所述的一种耐高温碱性木聚糖酶，其特征在于，所述木聚糖酶由嗜热芽孢杆菌CCTCC M2013537经液体深层发酵制备。

3.如权利要求2所述的一种耐高温碱性木聚糖酶，其特征在于，所述耐高温碱性木聚糖酶的制备方法如下：将保存完好的嗜热芽孢杆菌CCTCC M2013537的斜面菌种经活化和一、二、三级种子培养以及一级种子罐培养逐级扩大培养得到种子液，以6%接种量接入发酵罐，培养温度37-45℃，搅拌速度200-700rpm，通风量（V/V）1:1-3,培养时间10-15h；然后以1-2℃/h降温速率缓慢降温至10-15℃，恒温培养15-20h；继续以1-2℃/h降温速率缓慢降温至2-5℃，此时，将一级种子罐发酵液以4%接种量追加接入发酵罐，恒温培养20-30h；最后以1-2℃/h升温速率缓慢升温至10-15℃，恒温培养15-20h；继续以1-2℃/h升温速率缓慢升温至37-45℃，恒温培养15-20h；发酵液经过滤、浓缩、调配、精滤、干燥得耐高温碱性木聚糖酶，所述调配过程加入浓缩酶液总重量0.5-5%中草药剂粉。

4.如权利要求3所述的一种耐高温碱性木聚糖酶，其特征在于，所述种子培养基重量组成为：酵母粉0.3-0.5%，葡萄糖1-1.5%，蛋白胨0.3-0.5%，牛肉膏0.5-0.8%，磷酸氢二钾0.8-1.5%，中草药剂粉1.5-2%，海藻糖1-3%，硫酸钙0.1%,氯化镁0.2%,柠檬酸钠0.1-0.3%，不足部分纯净水补足，pH值5-11，121-123℃灭菌30-40min。

5.如权利要求3所述的一种耐高温碱性木聚糖酶，其特征在于，所述种子罐培养基重量组成为：麦芽糊精5-15%，酵母粉0.4-0.8%，中草药剂粉1.5-2%，海藻糖1-3%，蛋白胨0.1-0.5%，玉米浆0.1-0.5%，磷酸氢二钾0.8-1.5%，硫酸镁0.05-0.1%，柠檬酸钠0.1-0.5%，桦木木聚糖0.1-0.8%，不足部分纯净水补足，pH值5-11，121-123℃灭菌30-40min。

6.如权利要求3所述的一种耐高温碱性木聚糖酶，其特征在于，所述种子罐发酵液菌体浓度为7.0x10⁸-8.0x10⁸个/ml。

7.如权利要求3所述的一种耐高温碱性木聚糖酶，其特征在于，所述发酵培养基组成为：麦芽糊精50-150g，玉米粉50-60g，豆饼粉15-25g，中草药剂粉30-50g，海藻糖30-40g，桦木木聚糖5-15g，酵母粉4-8g，玉米浆1-5g，硫酸铵1-3g，磷酸氢二钾1-2g，磷酸二氢钾1-2g，柠檬酸钠1-5g，消泡剂0.1-1g,纯净水l000mL，pH值5-11，121℃灭菌20min。

8.如权利要求3-7任一所述的一种耐高温碱性木聚糖酶，其特征在于，所述中草药粉剂的制备方法如下：称取黄芪20-30份；党参10-18份；柴胡10-15份；黄芩10-15份；分别将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水，控制温度70℃～90℃保持2～4h，然后降温至45-60℃，加入混合物料总重量5-10%的混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，所述乙醇和丙醇的质量比例为1：1-1.5，控制温度至60℃～78℃保持3～4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得中草药粉剂。