[发明专利]一种GM-CSF-TAT-CEA重组蛋白及其方法和应用有效
| 申请号： | 201310684716.3 | 申请日： | 2013-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN103788213A | 公开（公告）日： | 2014-05-14 |
| 发明（设计）人： | 叶永清;张超;苏国新 | 申请（专利权）人： | 上海柯莱逊生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/70;A61K39/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 上海三方专利事务所 31127 | 代理人： | 吴干权;钱品兴 |
| 地址： | 201201 上海市浦东新区张江*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 gm csf tat cea 重组 蛋白 及其 方法 应用 | ||
1.一种GM-CSF-TAT-CEA重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种制备权利要求1所述重组蛋白的方法，其特征在于该方法由以下步骤组成：
a.将GM-CSF、TAT和CEA通过酶切克隆到质粒pET-15b的克隆位点中构建重组质粒，
b.重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞，进行重组蛋白的表达，
c.重组蛋白转化体的纯化收集。
3.如权利要求2所述的制备重组蛋白的方法，其特征在于在所述的步骤（a）所述的酶切为：在GM-CSF的基因序列两端添加酶切位点Nde I和Nco I，在TAT的基因序列两端添加酶切位点Xho I和Nde I，以及在CEA的基因序列两端添加酶切位点BamH I和Xho I。
4.如权利要求2所述的制备重组蛋白的方法，其特征在于：通过Ni-NTA柱分离纯化所述的重组蛋白。
5.一种权利要求1所述重组蛋白在制备肿瘤治疗药物中的应用。
6.一种权利要求1所述重组蛋白制备DC疫苗的方法，其特征在于将所述重组蛋白刺激诱导健康C57BL/6小鼠经由骨髓制备的DC细胞，制得DC疫苗。
7.如权利要求6所述的重组蛋白制备DC疫苗的方法，其特征在于所述的重组蛋白的浓度为25～100ug/ml。
8.如权利要求7所述的重组蛋白制备DC疫苗的方法，其特征在于所述的重组蛋白的浓度为25～50ug/ml。
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