[发明专利]急性髓系白血病相关miRNA标志物组及其特异引物与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种急性髓系白血病相关miRNA标志物组及其特异引物与应用，属于医学分子生物学技术领域。

背景技术

急性髓系白血病（Acute Myeloid Leukemia，AML）是一种异质性髓细胞肿瘤，也称急性非淋巴细胞性白血病，常进展迅速。其特点是造血干细胞正常分化受阻，恶性肿瘤细胞克隆性增生取代正常造血，从而造成贫血、出血、感染及脏器浸润等一系列症状。在恶性肿瘤所致的死亡率中，白血病在儿童及35岁以下成人中居第一位。在我国，白血病中以急性髓系白血病的年发病率最高，约占所有病例的58.7%。

急性髓系白血病不仅需要早期及时诊断，而且在化疗达到完全缓解后也依然需要不断监测病情并观察进展，及时采取相应的手段积极干预治疗。目前，急性髓系白血病患者的诊断和治疗方案主要依据细胞遗传学因素。虽然已有某些专利研究利用基因或蛋白标志物对患者进行分类，如中国专利文献（200910214195.9PDCD7基因在早期判断急性髓系白血病预后中的应用）；（200910214196.3CGI－135基因在早期判断急性髓系白血病预后中的应用）；（201010213640.2一种用于检测急性髓系白血病化疗疗效相关的基因组合、引物、探针和用途）；（201210496651.6白血病细胞蛋白质谱特征分子的检测方法）。但是这种分类仅依据mRNA和蛋白表达的差异，具有一定的局限性，忽略了同样具有重要功能作用的非编码RNA分子（主要是微RNA，miRNA）。因此，结合miRNA芯片所显示的表达情况，会进一步丰富基因表达谱，为急性髓系白血病提供更明确的诊断和预后手段。

MicroRNA（微RNA，miRNA）是细胞内一类在进化上高度保守，长度约为22个核苷酸的非编码RNA的基因产物。MiRNA由一段具有发卡结构的单链RNA前体经Drosha酶和Dicer酶的剪切后生成。MicroRNA通过与目标mRNA分子的3’端非编码区域（3’－UTR）互补配对，使目标mRNA分子的翻译受到抑制或引起特异性的对mRNA分子的切割，从而在转录后水平对靶基因的表达进行调控。研究表明miRNA参与包括细胞增殖、凋亡、细胞分化、发育和逆境应答等多种生物学过程，因此人体的众多生命活动和疾病的发生发展都与miRNA的变化密不可分。近期研究发现miRNA异常表达和一系列白血病有着密不可分的关系。已有研究证实miRNA在造血过程粒细胞形成中起到重要的作用。比如在对人类早幼粒细胞株HL-60的研究中发现，miR-21，miR－196b的失调可抑制G-CSF诱导的粒细胞生产。比如在正常人髓系细胞中富集的miR－223参与了粒细胞的发生过程。在miRNA与血液系统恶性疾病的关系中研究最为深入的是miR－15a和miR－16－1与人慢性淋巴白血病（CLL）的相关性。miR－15a和miR－16－1定位于CLL中最普遍的基因组织异常－13q14.3区域的杂合缺失和转座位置，该缺失直接导致它们的表达减低。miR－15a和miR－16－1通过靶向抗凋亡基因BCL2，以类似于抑癌基因的作用抑制B淋巴细胞的过度增殖，而它们的缺失则导致B细胞增殖能力显著增强，从而脱离正常的增殖凋亡平衡走向恶性转化的途径。由于miRNA的变化早于基因和蛋白的改变，也早于疾病症状的出现，由此检测miRNA的动态变化，有可能为急性髓系白血病的发生发展提供线索，进而可以指导临床进行早期诊断，有效控制疾病的发展。

然而，到目前为止，miRNA用于急性髓系白血病早期诊断中的应用报道非常少。如中国专利文献200880003736.7，名称：用于急性髓细胞白血病（AML）的诊断、预后和治疗的基于微RNA的方法和组合物。该发明公开了用于白血病相关疾病,特别是急性髓性白血病的诊断、预后和/或治疗的利用miRNA特征的方法和组合物。

中国专利文献200910083737.3，名称：三个microRNA在人急性髓系白血病诊断和治疗中的应用。该发明公开了三个miRNA（miR－451，miR－29a和miR－142－3p）在急性髓系白血病诊断和治疗中的应用。涉及在人急性髓系白血病人外周血单个核细胞中表达明显减少的miR－451，miR－29a和miR－142－3p的功能及其在AML诊断、预后和治疗中的应用。