[发明专利]一种检测WNT信号通路的试剂、PCR检测方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，尤其涉及一种检测WNT信号通路的试剂、PCR检测方法及其应用。

背景技术

Wnt信号通路是存在于生物体内的一条极其保守的信号传导通路，在胚胎发育和疾病发生过程中起着非常重要的作用。目前，已经建立起来的Wnt信号通路包括经典通路和非经典通路。经典通路即Wnt/β-catenin通路，非经典通路包括Wnt/PCP通路和Wnt/Ca2+通路。在经典的Wnt信号通路中，Wnt因子通过激活细胞膜上的Frizzled/LRP6受体复合物抑制细胞内游离β-catenin蛋白的磷酸化和降解，游离的β-catenin蛋白能够与细胞核内的TCF/LEF-1家族转录因子结合激活Wnt靶基因的表达。Wnt因子如何通过受体向下游传递β-catenin信号一直是Wnt信号通路的谜团和研究热点之一。

目前研究核心信号通路的核心分子调控机制，已经成为治疗肿瘤的一种关键手段，尤其是近年来WNT信号通路在肝癌中的研究，已经成为研究开发肝癌药物研发领域的急需解决的重要问题。

发明内容

本发明针对现有技术中如何确定WNT核心信号分子的调控，如何解释核心分子在肿瘤细胞中的变化的困难，提供了一种检测细胞凋亡信号通路的试剂和PCR检测方法，本发明将涉及细胞凋亡的信号分子集中在一个平板上，通过做一次实时荧光定量PCR反应，反应细胞的生存状态，探讨在肝癌细胞系中引起WNT信号通路变化的可能靶分子与靶途径，为研究核心WNT信号蛋白的调节提供最直接的证据。

为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现：

一种检测细胞WNT信号通路的试剂，它包括以下引物：

（1）检测AES基因的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-ACCCCAGCAACTCAAATTCA-3'；

5'-AAGCCGTAGGACATCTCGTA-3'；

（2）检测APC基因的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-CCTCATCCAGCTTTTACATGG-3'；

5'-GCCCGAGCCTCTTTACTG-3'；

（3）检测AXIN1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-TGGAGCCCTGTGACTCGA-3'；

5'-GGGACACGATGCCATTGTTAT-3'；

（4）检测AXIN2基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-AGCCAAAGCGATCTACAAAAG-3'；

5'-AAGTCAAAAACATCTGGTAGGC-3'；

（5）检测BCL9基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-CCCCATCAAATGCTACAGC-3'；

5'-TTTCAACCTGGCCCTTCAAA-3'；

（6）检测BTRC基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-ACCAACATGGGCACATAAACT-3'；

5'-TGGCATCCAGGTATGACAGAA-3'；

（7）检测CCND1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-GCTGCGAAGTGGAAACCAT-3'；

5'-CCTCCTTCTGCACACATTTGA-3'；

（8）检测CCND2基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-TTTGCCATGTACCCACCGT-3'；

5'-AGGGCATCACAAGTGAGC-3'；

（9）检测CSNK1A1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-AGTGGCAGTGAAGCTAGAATC-3'；

5'-CGCCCAATACCCATTAGGAAGT-3'；

（10）检测CSNK1A2基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-CGAGTTGCTTCCCGATACTT-3'；

5'-ACTTGCCAGCATACAACCCA-3'；

（11）检测CTBP1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-TCGGAACCCTTCAGCTTTAG-3'；

5'-CTCGCTGTACCATGCAGC-3'；

（12）检测CTNNB1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-ATGTCCAGCGTTTGGCTGA-3'；