[发明专利]抗人心肌肌钙蛋白I的重组抗体及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种抗人心肌肌钙蛋白I的重组抗体，其特征在于，包括由抗人心肌肌钙蛋白I的鼠源抗体的轻链可变区与人IgG1的轻链恒定区构成的轻链和由抗人心肌肌钙蛋白I的鼠源抗体的重链可变区与人IgG1的重链恒定区构成的重链。

2.如权利要求1所述的抗人心肌肌钙蛋白I的重组抗体，其特征在于，所述抗人心肌肌钙蛋白I的鼠源抗体由保藏号为CCTCC C2013185的杂交瘤细胞产生。

3.如权利要求1所述的抗人心肌肌钙蛋白I的重组抗体，其特征在于，所述轻链可变区含有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

4.如权利要求1所述的抗人心肌肌钙蛋白I的重组抗体，其特征在于，所述重链可变区含有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

5.一种抗人心肌肌钙蛋白I的重组抗体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

分别构建含有如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列的表达载体，其中，含有SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列的表达载体含有人IgG1的轻链恒定区的表达基因，含有SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列的表达载体含有人IgG1的重链恒定区的表达基因；

将所述表达载体转染到同一宿主细胞中；

从所述宿主细胞中回收得到所述抗人心肌肌钙蛋白I重组抗体。

6.如权利要求5所述的抗人心肌肌钙蛋白I的重组抗体的构建方法，其特征在于，待插入如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列的表达载体预留有XbaI和PmlI双酶切位点；待插入如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列的表达载体预留有NheI和HindIII双酶切位点。

7.如权利要求6所述的抗人心肌肌钙蛋白I的重组抗体的构建方法，其特征在于，所述如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列是通过如下步骤制备获得：

从保藏号为CCTCC C2013185的杂交瘤细胞中提取RNA，用反转录试剂盒进行RT-PCR，RT-PCR扩增产物70℃酶失活后作为模板，以SEQ ID NO.5及SEQ ID NO.6所示的引物序列进行PCR，回收PCR产物，PCR产物用rTaq DNA聚合酶进行加A反应后插入到pMD-18T载体中，转化到DH5α感受态细胞中表达；

回收DH5α感受态细胞表达的产物，使用如SEQ ID NO.7及SEQ ID NO.8所示的引物序列进行PCR，得到所述SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；

所述如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列是通过如下步骤制备获得：

从保藏号为CCTCC C2013185的杂交瘤细胞中提取RNA，用反转录试剂盒进行RT-PCR，RT-PCR扩增产物70℃酶失活后作为模板，以SEQ ID NO.9及SEQ ID NO.10所示的引物序列进行PCR，回收PCR产物，PCR产物用rTaq DNA聚合酶进行加A反应后插入到pMD-18T载体中，转化到DH5α感受态细胞中表达；

回收DH5α感受态细胞表达的产物，使用如SEQ ID NO.11及SEQ ID NO.12所示的引物序列进行PCR，得到所述SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。

8.一种编码如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的DNA。

9.一种编码如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的DNA。

10.一种包含编码如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的DNA和/或编码如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的DNA的真核细胞表达载体。

11.一种如权利要求10所述的真核细胞表达载体转染的宿主细胞。

12.如权利要求1所述的重组抗体在制备检测心肌肌钙蛋白I检测试剂或检测仪器中的应用。

13.一种心肌肌钙蛋白I的检测试纸，其特征在于，包括如权利要求1所述的重组抗体。