[发明专利]LAMP1绿色荧光表达载体、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种LAMP1绿色荧光表达载体，其特征在于，表达LAMP1和绿色荧光蛋白的融合蛋白，所述表达载体以pEGFP-c1载体为骨架载体，在pEGFP-c1载体多克隆位点融合了LAMP1编码基因。

2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述LAMP1编码基因位于pEGFP-c1载体的EcoR I/BamH I之间。

3.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体的核苷酸序列为序列表中的SEQ ID No：5。

4.一种制备LAMP1绿色荧光表达载体的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：用人类子宫颈癌细胞Hela细胞的cDNA作为模板进行PCR扩增，获得含有EcoR I和BamH I酶切位点的LAMP1 DNA片段，其中，所述PCR扩增引物为序列表中的SEQ ID No：1和SEQ ID No：2；

步骤2：将所得LAMP1 DNA片段和pEGFP-c1载体分别用EcoR I和BamH I进行双酶切，得到LAMP1基因和酶切后的pEGFP-c1载体；

步骤3：将所得LAMP1基因和酶切后的pEGFP-c1载体用DNA连接酶进行连接，得到pEGFP-c1-LAMP1载体。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1中PCR扩增的反应条件为：起始98℃5min；然后98℃10s，58℃30s，70℃2min，进行35个循环；最后72℃10min。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中LAMP1基因和酶切后的pEGFP-c1载体的质量比为2.5:1-5:1；所述步骤2中所用的DNA连接酶为T4DNA连接酶。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2和所述步骤3之间还包括如下步骤：

将所得LAMP1基因和酶切后的pEGFP-c1载体进行纯化。

8.用权利要求1至3任一项所述的表达载体转染的细胞，其特征在于，所述细胞为真核细胞。

9.一种细胞检测试剂，其特征在于，包括权利要求1至3任一项所述的表达载体。

10.权利要求1至3任一项所述的表达载体或权利要求9所述的细胞检测试剂在检测溶酶体在靶细胞中定位的用途。