[发明专利]对虾桃拉综合症病毒可视化LAMP检测试剂及检测方法

权利要求书

1.对虾桃拉综合症病毒可视化LAMP检测试剂，其特征在于：针对对虾桃拉综合征病毒基因组保守区的衣壳蛋白基因序列，设计6条特异性扩增引物，其中包括两条外引物F3和B3、两条内引物FIP和BIP、两条环引物LF和LB，所述的F3为5'- GGTCCTGGACTTCAAACA -3'，所述的B3为5'-TTGCGTGGTGGGACTA-3'，所述的FIP为5'-AGGTTCCACAATCTTGATGAATGAT-CTGTTACATTCTTAGACAGCACTA-3'，所述的BIP为5'-TCACTGTTAGTAACACTACCTCCT-CCTGCTAACCCAGTCGA-3'，所述的LF为5'-ATCCCAATCACTAATCAGAATG-3'，所述的LB为5'-AGTCCTCCACTGGTTGT-3'；

所述的对虾桃拉综合症病毒可视化LAMP检测试剂，所述的扩增引物加入反应试剂后共同组成LAMP检测液体系，所述的反应试剂包括反应缓冲液Bst DNA polymerase bufferr、链置换DNA聚合酶、镁离子、二价锰离子、甜菜碱、脱氧核糖核苷三磷酸dNTPs、颜色指示剂，余量为水。

2.根据权利要求1所述的对虾桃拉综合症病毒可视化LAMP检测试剂，其特征在于：所述的颜色指示剂为钙黄绿素，或是SYBR Green。

3.根据权利要求1所述的对虾桃拉综合症病毒可视化LAMP检测试剂，其特征在于：所述的镁离子为MgSO₄ 溶液；所述的二价锰离子为MnCl₂溶液。

4.根据权利要求1或2或3任一项所述的对虾桃拉综合症病毒可视化LAMP检测试剂，其特征在于：所述的LAMP检测液体系中的各组分浓度分别为：F3 0.2μmol/L～8μmol/L，B3 0.2μmol/L ～8μmol/L，FIP 0.2μmol/L～8μmol/L，BIP 0.2μmol/L～8μmol/L，LF 0.2μmol/L～8μmol/L，LB 0.2μmol/L～8μmol/L，反应缓冲液Bst DNA polymerase buffer 1×、链置换DNA聚合酶 4U～40U、镁离子0.8 mmol/L～10 mmol/L、二价锰离子0.02～1.25 mmol/L、甜菜碱0.04 mmol/L～1 mmol/L、脱氧核糖核苷三磷酸dNTPs 0.2 mmol/L～4mmol/L、钙黄绿素25μmol/L～125μmol/L，或1×～10×SYBR Green代替钙黄绿素25μmol/L～125μmol/L。

5.根据权利要求4所述的对虾桃拉综合症病毒可视化LAMP检测试剂，其特征在于：所述的LAMP检测液体系中的各组分浓度分别为：F3 0.4μmol/L，B3 0.4μmol/L，FIP 0.8μmol/L，BIP 0.8μmol/L，LF 0.4μmol/L，LB 0.4μmol/L，反应缓冲液Bst DNA polymerase buffer 1×、链置换DNA聚合酶8U、7mmol/L MgSO₄、0.08mmol/L MnCl₂、甜菜碱0.2mmol/L、脱氧核糖核苷三磷酸dNTPs 0.6mmol/L、钙黄绿素100μmol/L，或4×SYBR Green代替钙黄绿素100μmol/L。

6.一种用权利要求1～5任一所述的对虾桃拉综合症病毒可视化LAMP检测试剂的检测方法，其特征在于：所述检测方法的检测步骤包括：

(1)提取待检样品的基因组DNA；

(2)配制LAMP检测液体系；

(3)在LAMP检测液体系中加入步骤（1）提取的待检样品基因组DNA；

(4)将步骤（3）配制的反应体系混合均匀；

(5)将步骤（4）的反应体系置于恒温设备；

(6)按反应程序进行扩增反应，反应程序依次为： 55℃～70℃  30min～120 min， 80℃～100℃  5min，10℃ 5min；

(7)反应结束后，根据颜色反应判断检测结果，判断标准为：肉眼直接观察或在紫外光下观察，扩增产物颜色呈现黄绿色荧光的样品判断为样品中存在对虾桃拉综合症病毒，反之扩增产物颜色无变化不存在对虾桃拉综合症病毒。