[发明专利]一种AGPS基因mRNA水平的原位杂交检测试剂盒及检测方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，更具体地说，是涉及与癌症病理演变前期mRNA表达改变(病理演变过程中)的相关检测技术。 

背景技术

   根据国内外权威机构提供的资料，我国每年癌症的新增人数已达到312万，死亡人数近260万，患者超过700多万，全球每年新增癌症患者800万，死亡人数接近800多万，患者约有8400多万人，到2020年以上人数将翻一番，这是一组可怕的数字。癌症诊治成本越来越高，按癌症患者的年治疗费用20万（贫穷地区可能偏高，发达地区可能远远高出20万），700多万患者，每年的花费是1.4万亿人民币，扣除成本35%约4千亿，每年约有1万亿人民币白白消耗了。而且，癌症患者大部分会在治疗后不久死亡。因此，现有的临床癌症诊治模式一定要改变，本发明的创新点是提前做到预防性筛查，在瘤块没有出现之前筛查AGPS基因的mRNA表达量，对表达量增高者，及时介入预防性调控和预防性治疗，做到基因水平癌症的治未病。

   2005年美国卫生研究院、癌症研究院、疾控中心等八家单位做了 抗癌大战中是失败，结论是癌症死亡率没有降低，其列举出造成抗癌大战失败的几个因素是：1.肿瘤细胞异质性（多态性）；2.肿瘤细胞耐药性；3.抗癌药物设计思路不完善（动物模型设计不科学）等。同时，该报告中亦提出应重新审视现有诊治癌症的措施。

   本发明人在长期研究中发现，导致癌症死亡率不降的重要原因是不能做到真正的早期诊断。依照现有的临床医学影像（B超、CT、核磁共振成像等）及和其它生化（癌抗原、癌胚抗原、糖类激素、细胞膜因子、细胞核因子、细胞流式技术）指标来诊断癌症，都是肿瘤形成后诊断，前者要有组织学变化或已有占位性病变，后者大部分是肿瘤形成后所分泌、释放、或肿瘤的标记物。传统临床观念认为占位性癌块在2公分下是属于早期癌症的诊断，这一概念值得认真讨论，2公分以下癌块属早期这一界定科学性是不够严谨的，从细胞学角度来分析，1公分的肿块约有一亿个肿瘤细胞，2公分的肿块其三维空间的细胞叠加数远不止2亿个肿瘤细胞，从癌变前期到单克隆癌细胞产生及形成2公分的癌块，其病理演变过程相当长，可能是5年或10年、甚至是10年以上（特殊病例除外），很难证实的是在这个病理演变过程中，肿块是癌症唯一的发生地和单独的病灶，可能癌细胞早已迁移到其它组织或器官生长。临床研究早已证实，一旦形成肿块的同时，其它癌细胞通过不同途径迁移到其它部位克隆生长，一旦切除原发灶后，其它器官复发灶或多发癌块灶先后形成。因此，在临床上以2公分以下的癌肿块大小来界定早期与否，不够严谨（有些病例，在发现原发病灶时，同时发现转移病灶，不在我们表述的内容中），其实这时已经是晚期诊断和晚期治疗，这是导致癌症死亡率不降的真正原因。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，为了寻求更早期的诊断癌症、治疗癌症、以及预防癌症，已取得长足进步。至今，我们已有可能在基因的一级转录功能产物（mRNA水平或microRNA）上做更精确的早期筛查和诊断，在癌变前期或癌细胞形成（单克隆）前,就可以做到早期预测和筛查。

癌细胞生长需要大量的脂质，因为癌细胞分裂和增殖的速度快，而它们需要脂质来装配细胞膜。在细胞结构中脂质演绎着不同的角色，研究中证实了脂质还有发送信号的功能，促进癌症生长。科学家研究了醚脂的减少对人类皮肤癌细胞和原发性乳腺肿瘤如何产生影响。他们靶向了对醚脂的形成至关重要的酶：烷基甘油酮磷酸核酶（alkylglycerone phosphate synthase，AGPS）。

研究首次证实，正常细胞癌变会使AGPS表达加强，失活的AGPS对癌细胞的侵袭性大大降低，使得癌细胞移动和侵袭变得困难。研究过程中还比较了失活AGPS对注入癌细胞小鼠的影响，AGPS酶失活的小鼠体内没有肿瘤，但没有失活的酶加快了小鼠形成肿瘤。发现抑制AGPS表达可以将癌细胞的醚脂耗尽。AGPS改变了对癌细胞存活和扩散能力至关重要的其他脂质的水平，包括有前列腺素和酰基磷脂。

    本发明选择多组临床标本（癌症病人、高危人群、正常对照）采用核酸原位杂交技术和免疫组化方法对AGPS基因mRNA癌症的早期预警进行检测分析。本发明人在研究中发现AGPS基因mRNA在癌患者、癌症高危人群、正常对照人有明显的表达量变化，将AGPS基因mRNA作为癌变病理变化前期筛查指标，有非常重要的临床诊断意义，及癌症治疗后的复发、转移预警也有非常重要的临床意义。