[发明专利]血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂

说明书

技术领域

本发明涉及检测试剂技术领域，尤其是涉及一种血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂。

背景技术

α1-抗胰蛋白酶(AAT)又称α1胰蛋白酶抑制剂，属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族的成员，为单链糖蛋白，由一条连接3个寡糖链的多肽链组成，分子量约为52kDa，PI值为4.8。作为人体内最重要的蛋白酶抑制物，α1-抗胰蛋白酶主要由肝细胞合成，在正常的血浆中能抑制90％以上的蛋白酶的活性，其主要能够抑制中性粒弹性蛋白酶，在所有的丝氨酸蛋白酶抑制剂中α1-抗胰蛋白酶的血管通透性较强，因此α1-抗胰蛋白酶在肺组织中的浓度比其它丝氨酸蛋白酶抑制因子要高，而且对弹性蛋白酶的专一性更强，主要抑制胰蛋白酶和嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的活性，保护正常细胞不受蛋白酶的破坏和损害，可抑制感染和炎症，起到维持机体环境稳定的作用。

α1-抗胰蛋白酶作为一种重要的急性期反应蛋白，其在正常人体内血清中浓度的参考范围是0.9-2.0g/L，在炎症反应（如：感染性疾病，类风湿疾病）、组织坏死、肿瘤及外伤这些疾病见升高，肝实质细胞炎症的发生通常伴随α1-抗胰蛋白酶的水平升高；降低见于先天性缺乏症或减少症、严重肝功能障碍、肾病综合征等疾病，研究发现α1-抗胰蛋白酶的缺乏是一种遗传性疾病，最常见的α1-抗胰蛋白酶严重缺乏的纯合基因型为PiZZ型，血清中α1-抗胰蛋白酶水平约为正常人的10%～20%，在慢性阻塞性肺病(COPD)的发病中起着重要作用。

因此，快速准确定量检测血清中α1-抗胰蛋白酶非常重要。目前，α1-抗胰蛋白酶检测的主要方法有：血清胰蛋白酶抑制容量试验、单向免疫扩散法、火箭免疫电泳法和ELISA法，但均存在操作繁琐，耗时长的缺点，不适用于急诊病人和临床病人及时诊断。免疫比浊法具有操作简单、快捷、灵敏，可采用自动生化分析仪快速高通量测定的优点，因此，开发出适合大中小医院以及基层单位临床应用的血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，将有助于疾病诊断、治疗和预后。

发明内容

本发明的目的是提供一种血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，它具有灵敏度高、稳定性好，能够适用于自动生化分析仪，且操作简单、检测快速的特点。

本发明所采用的技术方案是：血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品，所述

———试剂R1包括：pH5.0-9.0的缓冲液20-500mM、界面活性剂0.01-2.0g/L、反应促进剂0.1-12.0g/L、电解质50-500mM、稳定剂0.1-20.0g/L、抑菌剂0.1-10.0g/L；

———试剂R2包括：pH6.0-9.0的缓冲液20-300mM、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体2.0-100.0g/L、电解质50-500mM、稳定剂0.1-20.0g/L、抑菌剂0.1-10.0g/L；

———校准品包括：pH6.0-9.0的缓冲液20-300mM、人α1-抗胰蛋白酶3.00-6.00g/L、电解质50-500mM、稳定剂0.1-20.0g/L、抑菌剂0.1-10.0g/L。

所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液中的一种。

所述抗人α1-抗胰蛋白酶抗体为羊抗人多克隆抗体或兔抗人多克隆抗体。

所述界面活性剂为Tween20、Tween40、Span20、Span40、Span80、TritonX-100中的一种。

所述反应促进剂为聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000中的一种。

所述电解质为钠离子、钾离子、镁离子、钙离子中一种或多种。

所述稳定剂为牛血清白蛋白、明胶、丙三醇、蔗糖、葡萄糖中的一种。

所述抑菌剂为叠氮钠、山梨酸钾、Proclin200、Proclin300、庆大霉素中的一种。

本发明中：试剂R1提供了α1-抗胰蛋白酶抗原和抗体形成网状抗原抗体结构的液体环境，具有能使抗原抗体反应稳定平稳的特点；试剂R2具有使特定浓度抗体在2-8℃保存条件下抗原反应性稳定保存的特点。尤其是抗人α1-抗胰蛋白酶抗体能够与α1-抗胰蛋白酶抗原特异性反应，对于其他抗原无交叉反应性，而抗体为羊抗人多克隆抗体或兔抗人多克隆抗体。该校准品中人α1-抗胰蛋白酶提纯自人血浆。校准品可以为高浓度单点校准品，也可以为含系列浓度梯度的多点校准品。