[发明专利]与人MHC-I类分子结合的GRP78多肽表位

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药工程技术领域，包括筛选获得与人主要组织相容性复合物(MHC-I)类分子结合的GRP78多肽分子，以及编码这些多肽的DNA，RNA，特别涉及了与人MHC-I类分子结合的GRP78多肽表位。 

背景技术

葡萄糖调节蛋白78(Glucose regulated protein,GRP78)属于热休克蛋白70家族，由内质网合成和分泌，其基本功能是：作为分子伴侣，在真核生物内质网膜上，通过与新生多肽表面的疏水片段以非共价键短暂结合，促进蛋白质的正确折叠、装配以及跨内质网膜转运，在生物机体的生长发育中起重要作用；作为应激蛋白，在低糖、低氧等应激状态下大量表达，参与未折叠蛋白反应以维持细胞的稳定。 

研究表明，GRP78在人类肝癌、肺癌、结直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、纤维肉瘤及骨肉瘤等恶性肿瘤细胞的GRP78表达显著增高，说明GRP78与多种肿瘤发生相关；GRP78在恶性肿瘤的侵袭和转移过程中也有重要作用，抑制GRP78基因的表达可抑制肿瘤细胞在体内的侵袭能力以及转移能力；GRP78的过度表达还可使许多恶性肿瘤细胞不同程度的对多种化疗药物耐药，而如果抑制GRP78的表达则可使化疗药物对这些恶性肿瘤细胞的杀伤作用提高。综上所述，GRP78作为肿瘤相关抗原，与肿瘤的发生、侵袭转移及药物敏感性密切相关。 

随着对免疫应答分子机制研究的深入，现已逐渐认识到机体的免疫细胞并不是对应于各种各样的病原体或天然抗原的整体分子，而是针对各种各样抗原分子的抗原表位，即蛋白质抗原是通过其表位来体现其免疫特异性。目前的研究表明，CD8+T细胞所识别的靶抗原需先经抗原提呈细胞处理，之后以“抗原肽-MHC-I类分子”复合物的形式呈现在抗原提呈细胞或靶细胞表面，相应的与MHC-I类分子结合的抗原肽即为CTL表位。 

已有研究显示，利用GRP78核酸疫苗免疫非小细胞肺癌小鼠后，小鼠生存期明显延长，小鼠免疫细胞分泌细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)的水平和对靶细胞的杀伤率明增加，提示GRP78核酸疫苗激活了特异性的CTL 反应。而将GRP78作为肿瘤相关抗原，采用生物信息学手段，研究其CTL表位，并将其作为肿瘤免疫治疗的一个新靶点，到目前为止，未见有文献报道。 

发明内容

本发明的目的是提供能与人MHC-I类分子的结合位点进行结合、可激活特异性的细胞毒性T淋巴细胞的多肽表位；提供所述多肽表位在制备用于临床治疗和检测肿瘤性疾病疫苗中的用途。 

本发明根据抗原肽与MHC-I类分子相互作用的机理，从肝素酶的全长基因序列中筛选出侯选多肽表位，最终得到能有效与MHC-I类分子结合并能激活特异性T淋巴细胞的多肽表位，该多肽表位长度仅9个氨基酸序列，体外容易合成，方便临床应用。 

本发明的第一目的，即能与人MHC-I类分子的结合位点进行结合、可激活特异性的细胞毒性T淋巴细胞的多肽表位，筛选自人GRP78，为与人GRP78具有同源性的下列氨基酸序列，包括: 

GRP788-16,Ala Met Leu Leu Leu Leu Ser Ala Ala； 

GRP78236-244,Tyr Ile Asp Asn Gly Val Phe Glu Val； 

GRP78337-345,Ser Tyr Met Lys Pro Val Gln Lys Val； 

GRP78415-423,Val Leu Leu His Val Cys Pro Leu Tyr； 

GRP78416-424,Leu Leu His Val Cys Pro Leu Tyr Leu。 

本发明涉及的多肽表位，还可以为选自GRP788-16,GRP78236-244,GRP78337-345,GRP78415-423,GRP78416-424中的游离型多肽、融合型多肽和嵌合型多肽；以及以所述5条多肽之一为单体的各种形式的聚合体。 

本发明所涉及的多肽表位与功能或性质已知的蛋白质融合或嵌合，即这些蛋白质分子或嵌合分子包含了本发明涉及的多肽氨基酸序列，具有这些多肽的相同或相似活性。 

与本发明有关的多肽序列，可通过任何已有的体外多肽合成设备和不同技术原理人工合成。其获得方法主要有以下步骤，包括多肽的合成，纯化以及最后产品的收集，这些技术己经成熟并程式化，在相关领域被广泛应用。 

本发明的优点：