[发明专利]一种茶树RNA提取方法无效
| 申请号： | 201310654955.4 | 申请日： | 2013-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN103667259A | 公开（公告）日： | 2014-03-26 |
| 发明（设计）人： | 李叶云;添先凤;周月琴;江昌俊 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 安徽汇朴律师事务所 34116 | 代理人： | 胡敏 |
| 地址： | 230001 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 茶树 rna 提取 方法 | ||
1.一种茶树RNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）取茶树组织，加入茶树组织0.5～1.5倍重量的不溶性聚乙烯吡咯烷酮PVPP，液氮中研磨成粉末；
（2）将步骤（1）的粉末中加入提取液，每1g茶树组织加入4.5mL的提取液，混匀，每1g茶树组织中再加入250μL的β-巯基乙醇，水浴，得到粗样品；
（3）将步骤（2）的粗样品在4℃下离心，取上清转移至RNA提取试剂盒的过滤柱中，离心，获得上清液；
（4）将步骤（3）的上清液中加入0.5倍上清液体积的无水乙醇，混匀，获得粗提液；
（5）将步骤（4）的粗提液转移至RNA提取试剂盒的吸附柱中进行吸附，然后用RNA提取试剂盒中的去蛋白液和漂洗液洗涤吸附柱，最后用不含核酸酶的RNA-free水洗脱吸附柱上的RNA，获得茶树RNA。
2.如权利要求1所述的一种茶树RNA提取方法，其特征在于，所述步骤（1）中，茶树组织选自茶树嫩叶、成熟叶、茶树嫩根和茶树花蕾中的一种。
3.如权利要求1所述的一种茶树RNA提取方法，其特征在于，所述步骤（1）中，加入的PVPP重量与茶树组织的重量相等。
4.如权利要求1所述的一种茶树RNA提取方法，其特征在于，所述步骤（2）中，水浴温度为65℃，水浴时间为30min。
5.如权利要求1所述的一种茶树RNA提取方法，其特征在于，所述步骤（2）中，提取液的配方为：1.4mol/L的NaCl，重量百分比为2%的十六烷基三甲基溴化铵CTAB，100mmol/L的三羟甲基氨基甲烷的盐酸溶液Tris-HCl和20mmol/L的乙二胺四乙酸EDTA，溶剂为焦碳酸二乙酯DEPC水，pH8.0，配制后灭菌。
6.如权利要求1所述的一种茶树RNA提取方法，其特征在于，所述步骤（3）中，离心的转速为12000rpm，离心的时间为5min。
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