[发明专利]甘蔗叶多酚氧化酶的制备方法有效
| 申请号： | 201310648809.0 | 申请日： | 2013-12-04 |
| 公开（公告）号： | CN103627681A | 公开（公告）日： | 2014-03-12 |
| 发明（设计）人： | 杨洋;候杰;马万良;胡振兴;叶琴 | 申请（专利权）人： | 广西大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02 |
| 代理公司： | 广西南宁公平专利事务所有限责任公司 45104 | 代理人： | 翁建华 |
| 地址： | 530004 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 甘蔗 叶多酚 氧化酶 制备 方法 | ||
1.甘蔗叶多酚氧化酶的制备方法，其特征在于，采集新鲜甘蔗叶洗净并剪成碎块，按每克甘蔗叶碎块添加4mL冷丙酮，高速匀浆捣碎1分钟，停止30秒然后再次高速匀浆捣碎1分钟，形成悬浊液，将悬浊液用双层定性滤纸抽滤，所得滤渣用所述冷丙酮洗至呈白色为止，冷冻干燥所述滤渣，得到甘蔗叶丙酮粉，按每克甘蔗叶丙酮粉加入3℃、pH6.5、浓度为0.1mol/L磷酸缓冲液6mL，冷冻浸提后用纱布进行过滤，收集滤液，将所述滤液以10000r/min冷冻离心20分钟，收集上清液得到甘蔗叶多酚氧化酶粗酶液，所得甘蔗叶多酚氧化酶粗酶液采用Sephacryl S200进行凝胶排阻柱层析，收集活性组分，运用DEAE Sephadex A50纯化，得到甘蔗叶多酚氧化酶纯液，在真空下冷冻干燥得到甘蔗叶多酚氧化酶粉末。
2.根据权利要求1所述的甘蔗叶多酚氧化酶的制备方法，其特征在于，所述冷丙酮温度为-10℃。
3.根据权利要求1所述的甘蔗叶多酚氧化酶的制备方法，其特征在于，所述滤渣冷冻干燥、冷冻浸提、冷冻离心的温度均为3℃；所述冷冻浸提时间为4小时。
4.根据权利要求1所述的甘蔗叶多酚氧化酶的制备方法，其特征在于，采集新鲜甘蔗叶洗净并剪成碎块，按每克甘蔗叶碎块加入含表面活性剂的3℃、pH6.5、浓度为0.1mol/L的磷酸缓冲液6mL，然后高速匀浆捣碎1分钟，停止30秒后再次高速匀浆捣碎1分钟，形成匀浆，所得匀浆冷冻浸提后用纱布过滤，收集滤液，将所述滤液以10000r/min冷冻离心20分钟，收集上清液得到甘蔗叶多酚氧化酶粗酶液，所得甘蔗叶多酚氧化酶粗酶液采用Sephacryl S200进行凝胶排阻柱层析，收集活性组分，运用DEAE Sephadex A50纯化，得到甘蔗叶多酚氧化酶纯液，在真空下冷冻干燥得到甘蔗叶多酚氧化酶粉末。
5.根据权利要求4所述的甘蔗叶多酚氧化酶的制备方法，其特征在于，所述表面活性剂为吐温或Triton X-100。
6.根据权利要求5所述的甘蔗叶多酚氧化酶的制备方法，其特征在于，所述含表面活性剂吐温的磷酸缓冲液中，吐温与磷酸缓冲液的容积比为2.5%；或：含Triton X-100的磷酸缓冲液中，Triton X-100与磷酸缓冲液的容积比为0.2%。
7.根据权利要求4所述的甘蔗叶多酚氧化酶的制备方法，其特征在于，所述匀浆冷冻浸提、冷冻离心温度均为3℃，冷冻浸提时间为8小时。
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