[发明专利]一种胞內表达屋尘螨过敏原Derp2的重组乳酸乳球菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及遗传资源工程，具体涉及一种胞內表达屋尘螨过敏原Derp2的重组乳酸乳球菌L.lactis ND及其应用。

背景技术

过敏性疾病是临床上的常见病、多发病，是当前世界性的重大卫生学问题。其中，在引发过敏性疾病的众多吸入性过敏原中，尘螨是导致呼吸道变态反应性疾病的重要因素之一。尘螨是一类结构和成分复杂的生物，目前人们已从尘螨的数百种蛋白中初步鉴定出几十种过敏原；过敏原Derp2是其中最为主要的过敏原之一，约80%-90%的尘螨过敏患者对Derp2产生过敏反应。特异性免疫治疗（SIT）被认为是最有效的治疗过敏的方法，但成功的免疫治疗取决于高质量的变应原。目前，临床上用于诊断和治疗的尘螨粗提液含有大量非特异性杂质，严重阻碍了尘螨过敏原试剂的临床应用。为获得高质量的变应原，从天然产物中分离纯化过敏原（专利申请号：200410022961.9），操作繁复且纯度不高，重复性较差；利用分子生物学技术，在大肠杆菌（专利申请号：CN201210139240.0）、酵母等表达系统中表达过敏原Derp2被认为是一种可行的策略，但其安全性及后续过敏原的纯化限制了这些表达系统的实际应用。

近几年，随着对乳酸菌性质的不断研究，其益生特性逐渐被人们所认识并接受，特别是在治疗一些慢性疾病和自身免疫性疾病，如过敏，肠炎等，具有普通药物所不具备的优势。以乳酸菌作为表达系统，使抗原或其他功能性蛋白在粘膜表面进行表达释放，可以有效的避免传统表达系统（大肠杆菌）所带来的安全隐患及后续抗原的纯化问题，同时避免了在口服过程中蛋白的降解和口服耐受，更能促进抗原或功能性蛋白被免疫系统所吸收等。

有关乳酸菌疫苗的研究显示乳酸菌疫苗的效果与所要表达的蛋白形式存在着密切联系，如外源蛋白在乳酸菌表达系统内能否成功表达、外源蛋白的表达位置等。为使尘螨过敏原Derp2在乳酸乳球菌内的高效表达并发挥较好的预防效果，我们对Derp2天然基因进行了密码子优化，并以此为基础构建了一种胞內表达过敏原Derp2的重组乳酸乳球菌L.lactisND；同时通过动物实验对其在预防尘螨过敏疾病方面的效果进行验证。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基因优化的屋尘螨过敏原Derp2，提供一种胞內表达基因优化后的尘螨过敏原Derp2的重组乳酸乳球菌L.lactisND（保藏号为CGMCC No.8222），提供将所述过敏原用于预防屋尘螨过敏疾病的用途，提供将所述重组乳酸乳球菌用于预防尘螨过敏疾病的用途。

一方面，本发明提供了一种基因优化的屋尘螨过敏原Derp2，该过敏原基因mderp2的序列为SEQIDNo.1。

所述基因优化的屋尘螨过敏原基因序列mderp2是通过对来源于屋尘螨（Dermatophagoides pteronyssinus）的主要过敏原Derp2的天然基因序列SEQ ID No.2进行基因优化后获得的。

另一方面，本发明提供一种胞內表达基因优化的屋尘螨过敏原Derp2的重组乳酸乳球菌L.lactis ND（保藏号为CGMCC No.8222），所述菌株是通过将优化后的基因mderp2克隆到乳酸乳球菌的表达质粒pNZ8148上，构建胞内表达型质粒pNZ8148-ND，再将获得的胞内表达型质粒电转入宿主菌株L.lactis NZ9000而获得的。

另一方面，本发明提供了将所述过敏原用于预防屋尘螨过敏疾病的用途。

再一方面，本发明提供了将上述乳酸乳球菌用于预防尘螨过敏疾病的用途。

本发明涉及的表达基因优化的屋尘螨过敏原Derp2的重组乳酸乳球菌Lactococcus lactis ND，于2013年9月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址100101北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.8222

附图说明

图1表示屋尘螨过敏原Derp2基因突变位点对照图。

图2表示重组乳酸乳球菌L.lactis ND中Derp2蛋白的western blot检测。

如图：最左侧为蛋白分子Marker；1号泳道：纯化的Derp2，阳性对照；2号泳道：重组菌株L.lactis ND的细胞破碎液；3号泳道：阴性对照菌株L.lactis8148（不含Derp2基因）细胞破碎液

图3表示小鼠免疫的过程。