[发明专利]一种制备尿激酶粗品的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及从合格的尿液中制备尿激酶粗品的方法。

背景技术

尿激酶是一种碱性蛋白酶，由肾脏产生，主要存在于人体及哺乳动物的尿液中，血液凝固时人体的正常机能，但是在某些病理状态下，由血管内形成血栓堵塞血液流通时，就会造成严重后果。尿激酶是溶血栓药物，但它本身并不直接用于血块本身，而是首先激活体内的纤溶酶原，成为有活性的纤溶酶，纤溶酶作用于纤维蛋白酶凝块，使其分解成可溶性多碳。

尿激酶有多种分子量形式，高分子量的尿激酶溶解血栓临床效果要比低分子量的约高一倍，因此，国际上把尿激酶的分子量作为质量标准的检查项目之一，为减少低分子量的产生，生产过程中pH值不宜过低。

由于尿激酶有着重要的医药价值，所以相继有很多专刊报道了尿激酶粗品的提取方法，因人体尿液中尿激酶含量很低，取尿激酶的关键就是如何从大量的尿液中富集尿激酶，从目前发表的专刊来看，主要有三类方法：(1)、发泡法：即以高速搅拌使酶液发泡，然后使泡沫液化，加入硫酸铵使尿激酶沉淀。(2)、沉淀剂法：在尿液中加入沉淀剂，使尿激酶沉淀，尿激酶则保留在沉淀中。(3)、吸附剂法：此法应用最多，选择适当的吸附剂，有选择的吸附尿激酶。

本工艺就是采用离子交换树脂作为吸附剂，生产尿激酶粗品。

发明内容

本发明的目的是从合格的尿液中提取尿激酶粗品。。

本发明的技术方案是：利用吸附工序、脱附工序、盐析工序从合格尿液中制备尿激酶粗品的方法。本发明操作简单且有较高的收率。包括如下步骤：

(1)吸附工序：取合格尿液用二层纱布过滤，滤入搅拌罐中；在不断搅拌的同时，以缓慢的速度加入D-160A离子交换树脂，并用精密仪器测定，调节尿液pH到4.5～6.5之间；搅拌吸附1～2小时，弃去尿液，用水洗涤树脂去残尿及杂质，再用磷酸缓冲液洗至澄清为止；

(2)脱附工序：用含氯化钠的氨水搅拌洗脱0.5～1.5小时，抽滤，收集洗脱液，树脂再用同样溶液洗脱20～50分钟，收集洗脱液，合并二次洗脱液；

(3)盐析工序：按洗脱液的体积计算加入固体硫酸铵，搅拌溶解，达到50％～70％饱和度，于-4～0℃上清液用醋酸调pH到4.5～6.5，加1～3倍量丙酮，稍搅拌后，放置沉淀12～16小时，离心，收集沉淀的尿激酶盐析品；

(4)将尿激酶盐析品放置阴凉处保存；

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

所述的利用吸附工序、脱附工序、盐析工序从合格尿液中制备尿激酶粗品的方法，包括如下步骤：

1.吸附工序：

1.1取合格尿液500公斤，用二层纱布过滤，滤入搅拌罐中；

1.2在不断搅拌的同时，以缓慢的速度加入D-160A离子交换树脂，并用精密仪器测定，调节尿液pH到6.0；

1.3搅拌吸附1.5小时，弃去尿液，用水洗涤树脂去残尿及杂质，再用磷酸缓冲液洗至澄清为止；；

2.脱附工序：

2.1用含氯化钠的氨水搅拌洗脱1小时，抽滤，收集洗脱液，

2.2树脂再用同样溶液洗脱30分钟，收集洗脱液，合并二次洗脱液；

3.盐析工序：

3.1按洗脱液的体积计算加入固体硫酸铵，搅拌溶解，达到65％饱和度；

3.2于-4～0℃上清液用醋酸调pH到5.0；

3.3加2倍量丙酮，稍搅拌后，放置沉淀14小时，离心，收集沉淀的尿激酶盐析品；

4.将尿激酶盐析品放置阴凉处保存；

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。