[发明专利]人参皂苷M1的叔丁基二甲基醚液相制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及人参皂苷M1的叔丁基二甲基醚的液相制备方法属于中药技术领域。

背景技术

人参具有抗衰老、抗炎、抗过敏、降血糖、修复神经损伤和保肝等作用。近年来的研究表明，人参皂苷具有抗肿瘤的作用，大部分都是以Rg₃、Rh₁、Rh₂等为主要研究对象。他们在促进肿瘤细胞凋亡和肿瘤细胞分化等方面表现出显著作用，不同结构的人参皂苷在抗肿瘤活性方面存在差异，其中二醇型人参皂苷抗肿瘤活性明显强于三醇型人参皂苷。

随着皂苷药代动力学研究的深入，发现真正发挥抗肿瘤作用的是皂苷动物体内的次级代谢产物Compound K，人参皂苷Compound K属于原人参二醇型皂苷。研究表明人参皂苷Compound K的酯化衍生物具有更好的抗肿瘤活性。EM1(M1的硬脂酸酯、棕榈酸酯和油酸酯的混合物)与M1相比具有更强的抗肿瘤活性。但是EM1来源有限，难以分离纯化。而利用化学合成技术获得的系列M1衍生物水溶性差。采用酯键、醚键等方式给M1的修饰基引入水溶性较好的基团，使其兼具脂溶性和水溶性，人参皂苷M1的结构式上有六个羟基，从而选择性酯化和提高单酯化产率具有很重要的研究价值。

发明内容

本发明公开了一种液相制备人参皂苷M1的叔丁基二甲基醚的方法。采用高效液相色谱法探索最佳分离条件，包括检测波长，流动相比例，流速，确定样品各组分出峰时间，将优化后的条件应用于液相制备，从而达到快速准确的分离目的。

本发明的积极效果在于探索出最佳的人参皂苷M1的单叔丁基二甲基硅醚的液相制备条件，从而解决了人参皂苷M1的叔丁基二甲基醚的分离提纯难题。产物损失小且方法简捷可行。

具体方法

高效液相色谱法得到优化后的制备条件

色谱柱： C₁₈ 色谱柱(10×250mm,5μm)

检测波长：203 nm

                   流动相比例：95%甲醇/水

流速：1.0 mL/min

柱温：25℃

制备型高效液相法人参皂苷M1的叔丁基二甲基醚的出峰时间为20.6 min。

 

实验例1

仪器及试剂︰Agilent 1260 LC 型高效液相色谱仪；

LC3000型高效液相色谱仪；

            甲醇(99.9%),北京百灵威试剂有限公司；

哇哈哈纯净水；

1、色谱柱的选择

分别采用Agilent C₁₈不同长短的色谱柱进行分离实验，本实验选用10×250 mm，5 μm的C₁₈色谱柱，可以达到较好的分离效果。

2、 检测波长的选择

人参皂苷M1的单醚化衍生物采用液相进行检测时通过198-600 nm的紫外波长范围内进行检测，发现人参皂苷Compound K衍生物在203 nm下有最大吸收波长。因而在实验操作中采用203 nm作为本实验的检测波长。

3、流动相及其比例的组合

实验中根据人参皂苷M1的单醚化衍生物的结构特征，分别进行了液相色谱流动相比例选择，以经济快速准确为出发点，选择的流动相为甲醇/水体系，流动相比例为95%的甲醇/水。

4、流速的选择

在确定流动相的比例后，本实验也对流动相的流速也进行了条件优化，采用V_甲醇：V_水=95︰5的流动相，对各流速也进行了条件优化。实验结果表明在流速为1 mL /min时，分离效果达到最佳。

5、柱温的选择

确定流动相的配比和流速等条件后，实验对柱温的选择也进行了条件优化。实验考查了不同温度下的醚化产物分离度，实验结果发现，在柱温为室温25℃时，分离效果好。

6、确定人参皂苷M1的叔丁基二甲基醚的出峰时间

色谱柱：Agilent C₁₈ 色谱柱(4.6×250mm,5μm)

检测波长：203 nm

流动相比例：95%甲醇/水

流速：1.0 mL/min

柱温：25℃

进样量10 μL(样品浓度为5mg/mL)

得到人参皂苷M1的叔丁基二甲基醚的出峰时间为19.8 min；

峰面积为84%

液相色谱图如图1

7、人参皂苷M1的叔丁基二甲基醚的液相制备