[发明专利]一种乳酸片球菌菌株冷冻干燥制剂的制备方法无效
| 申请号： | 201310631973.0 | 申请日： | 2013-11-29 |
| 公开（公告）号： | CN103627637A | 公开（公告）日： | 2014-03-12 |
| 发明（设计）人： | 韩烨;洪小迪;谭茜倩;周志江 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N1/04 | 分类号： | C12N1/04 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 宋洁瑾 |
| 地址： | 300072*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 乳酸 球菌 菌株 冷冻 干燥 制剂 制备 方法 | ||
1.一种乳酸片球菌菌株冷冻干燥制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）活化乳酸片球菌PA003菌种于液体MRS培养基中，利用生长培养基进行培养，使其活性及存活性最佳；
（2）利用冷冻离心机离心法收集菌体，洗涤后，将菌体悬浮于已灭菌的冷冻干燥保护剂培养基中，通过逐步冷冻法将溶液冷冻，待其结冰后准备进行冷冻干燥；
（3）将结冰样品放置于冷冻干燥机中进行冷冻干燥；最后获得的冷冻干燥制剂密封避光放置于室温下贮藏。
2.根据权利要求1所述乳酸片球菌菌株冷冻干燥制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中生长培养基为10%(w/v)脱脂奶作为溶液基质的MRS-葡萄糖-果糖-蔗糖培养基。
3.根据权利要求2所述乳酸片球菌菌株冷冻干燥制剂的制备方法，其特征在于，所述MRS-葡萄糖-果糖-蔗糖培养基配方是指将葡萄糖0.66%，果糖0.66%，蔗糖0.66%代替MRS培养基配方的葡萄糖2%。
4.根据权利要求1所述乳酸片球菌菌株冷冻干燥制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中接种量为1%，培养温度37℃，培养时间14h。
5.根据权利要求1所述乳酸片球菌菌株冷冻干燥制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）冷冻干燥保护剂培养基为5%蔗糖的10%(w/v)脱脂奶溶液。
6.根据权利要求1所述乳酸片球菌菌株冷冻干燥制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）冷冻离心机转速10000rpm，在4℃下离心10min。
7.根据权利要求1所述乳酸片球菌菌株冷冻干燥制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）冷冻干燥温度-53℃，冷冻干燥时间24h。
8.一种乳酸片球菌菌株冷冻干燥制剂的使用方法，其特征在于，使用时利用生理盐水作为复性液在22℃下进行复性30min。
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