[发明专利]大兴安岭野生金老梅总三萜提取物的新型制备方法

说明书

技术领域：

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生植物金老梅里提取总三萜的新方法，特别是涉及一种利用高压脉冲电场技术提取、聚酰胺柱层析纯化、聚酰胺藕联大孔树脂二次纯化总三萜的新方法。

背景技术：

金老梅，别名金露梅，灌木，高0.5-2m。多分枝，树皮纵向剥落。小枝红褐色，幼时被长柔毛。现状复叶，小叶2对，稀3小叶；小叶片长圆形、倒卵长圆形或卵状披针形，长0.7-2cm，宽0.4-1cm，先端急尖或圆钝；基部楔形，全缘，边缘平坦，两面疏被柔毛或绢毛或脱落近无毛。花两性，单花或数朵生于枝顶，花梗密被长柔毛或绢毛；花直径2.2-3cm；花、果期6-9月。

国内一般用有机溶剂提取法提取总三萜，常用甲醇、乙醇做为溶剂。近年来也有采用微波辅助提取、超声波提取，用大孔树脂进行纯化的报道。传统方法提取总三萜需要几小时至十几小时，操作温度高且得率低，能耗大。

发明内容：

本发明主要采用高压脉冲电场技术提取，聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化，产品不仅得率高，而且纯度高。所得总三萜提取物用HPLC进行检测，含量最高可达96.1％。

优点：大大加快了提取速度，同时极大提高总三萜有效成分含量，克服了常规提取提取物纯度低、得率低的缺点。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种利用高压脉冲电场提取技术、聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化总三萜的新方法，其步骤如下：

(1)前处理：取新鲜金老梅叶或干燥好的叶子，清洗备用；

(2)高压脉冲电场提取：以不同浓度乙醇溶液为溶剂，液料比为1：10-15，在一定电场强度、适当脉冲数处理几分钟；

(3)精滤处理：采用一定过滤精度的聚四氟乙烯膜，在一定温度和压力下精滤处理；

(4)聚酰胺柱层析：

采用一定目数的聚酰胺树脂装柱，控制提取液与聚酰胺用量比，室温下以一定流速吸附饱和；解吸时先用水除杂，再用不同体积比浓度的乙醇溶液解吸，控制流速，收集洗脱液，检测总三萜含量；

(5)聚酰胺与大孔树脂树脂联用纯化：

取处理过的聚酰胺树脂铺在不同型号的大孔树脂柱上，径高比为1：5-7，过上步所得洗脱液，控制上样液质量浓度，上样速率；先用2BV去离子水冲洗树脂，再用不同体积比浓度的乙醇溶液，以1-3BV/h流速洗脱，收集洗脱液，检测总三萜含量；

(6)真空冷冻干燥：收集总三萜溶液，在适当温度、干燥压力下冷冻干燥；

(7)检测：采用高效液相色谱法，紫外检测器在一定波长进行检测，金老梅总三萜纯度为95％以上。

具体实施方式：

实施例1：

一种利用高压脉冲电场提取技术、聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化总三萜的新方法，其步骤如下：

(1)前处理：取100g新鲜金老梅叶，清洗备用；

(2)高压脉冲电场提取：以50％乙醇溶液为溶剂，液料比1：12，电场强度30kV/cm、脉冲数7，处理4分钟；

(3)精滤处理：采用聚四氟乙烯膜，过滤精度0.2μm，在50℃，0.2MPa压力下精滤处理；

(4)聚酰胺柱层析：

采用80目的聚酰胺树脂装柱，控制提取液与聚酰胺用量比1：6，室温下以3BV/h流速吸附饱和；解吸时先用水除杂，再用60、65、70％乙醇溶液解吸，控制流速，收集洗脱液；

(5)聚酰胺与大孔树脂树脂联用纯化：

取处理过的聚酰胺树脂铺在HPD100大孔树脂上，径高比为1：6，过上步所得洗脱液，上样液质量浓度2.0mg/mL，上样速率1BV/h；先用2BV去离子水冲洗树脂，再用75％的乙醇溶液，以1BV/h流速洗脱，收集洗脱液，检测总三萜含量；

(6)真空冷冻干燥：收集总三萜溶液，预冻温度-30℃，工作压力20Pa，升华温度55℃，解析温度60℃，得粉末1.74g；

(7)检测：采用高效液相色谱法，紫外检测器在一定波长进行检测，金老梅总三萜纯度为96.1％。

实施例2：

一种利用高压脉冲电场提取技术、聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化总三萜的新方法，其步骤如下：

(1)前处理：取50g新鲜金老梅叶，清洗备用；

(2)高压脉冲电场提取：以60％乙醇溶液为溶剂，液料比1：15，在电场强20kV/cm度、脉冲数5，处理3分钟；

(3)精滤处理：采用聚四氟乙烯膜，过滤精度0.3μm，在55℃、0.3MPa压力下精滤处理；

(4)聚酰胺柱层析：