[发明专利]人工培养蛹虫草子实体核苷有效部位制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及人工培养蛹虫草中有效成分的制备方法，尤其是一种由核苷类活性化合物组成的有效部位及其制备方法。

背景技术

蛹虫草（Cordyceps militaris（L.）Link），又名北冬虫夏草，蛹草，北虫草，蛹草菌等，分类学上属于真菌门(Eumycota)，子囊菌亚门(Ascomycotinia) , 核菌纲(Pyrenomycetes) , 球壳目(Sphaeriales) , 麦角菌科(Claviciptiaceae) ，虫草属(Cordycps)。研究表明（陈俐彤,曹红峰,黄文芳.蛹虫草的化学成份、药效及应用. 现代食品科技, 2005, 21(3): 192-194）：蛹虫草含有多种核苷类化合物（如虫草素、腺膘呤、次黄膘呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶、尿苷、腺苷等）、多糖、糖醇、甾醇类等成分。蛹虫草在降血脂，防止动脉硬化，保护心、脑组织，镇静催眠，增强巨噬细胞的活性，抗炎、抗癌、抗菌、抗衰老等方面均显示出良好功效。在冬虫夏草资源极其匮乏的情况下，蛹虫草作为与冬虫夏草同属的另一个种，且含有较多的活性成份和具有广泛的生物活性，因此，蛹虫草逐渐成为冬虫夏草的替代品之一。

天然蛹虫草资源稀少，其生长受到自然环境和气候的限制。因此，人们研究并开发了人工培养蛹虫草的技术和方法，可使蛹虫草的生长不受季节和环境的限制，从而可满足日常生活和临床用药的需求。同时，相关研究也表明（孙月, 薛阳, 王琦. 野生蛹虫草与组培蛹虫草子实体的成份测定与分析. 辽宁师专学报, 1999, 1(1): 1-2）：人工培养蛹虫草中所含成份与天然蛹虫草中的成份种类基本相同，且各种成份含量的差别也不大。

近年来，蛹虫草各种提取物的研究较多。如学者Sang Eun Park等 (Sang Eun Park, Hwa Seung Yoo, Cheng-Yun Jin, et al. Induction of apoptosis and inhibition of telomerase activity in human lung carcinoma cells by the water extract of Cordyceps militaris. Food and Chemical Toxicology, 2009, 47: 1667–1675)研究表明：蛹虫草水提物能够通过诱导癌细胞凋亡和抑制端粒酶活性，从而发挥抗肿瘤的作用。蛹虫草中的核苷类成份也研究得比较多，如有报道称（于荣敏, 汪宇. 人工蛹虫草中的核苷类活性物质及其制备方法和用途[P]. 2006），从人工培养蛹虫草中提取所得的核苷类活性物质，对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤率为57%，对H22腹水小鼠生存期的生延率可达91.9%。

同时，对于蛹虫草中的核苷类化合物的提取纯化方法也有较多的报道，如利用超声提取的方法（申进文, 孙晓萍, 赵旭, 等. 人工蛹虫草核苷类成分超声提取工艺优化及 HPLC 定量分析. 河南农业大学学报, 2011, 45(4): 391-394），可以从人工蛹虫草中提取出4种主要的核苷成分（尿苷、鸟苷、腺苷和虫草素），但未给出核苷类化合物在总提取物中的百分含量。也有学者（吕子明, 姜永涛, 吴立军, 等. 人工蛹虫草子实体化学成分研究. 中国中药杂志, 2008, 33(24): 2914-2917）利用大孔吸附树脂和硅胶色谱柱进行分离纯化，从人工培养蛹虫草中分离得到虫草素、腺苷、N6-(2-羟乙基)腺苷等核苷类化合物。但对蛹虫草中的核苷类化合物作为一个有效部位来进行提取纯化的工艺未见报道。

发明内容 

本发明的目的在于提供一种来源于人工培养蛹虫草的由核苷类化合物所组成的有效部位及其制备方法。

所述发明是通过下述步骤实现的：

（1）人工培养蛹虫草子实体干品进行粉碎，并过10～50目筛，得原料粗粉；

（2）向所得原料粗粉中加入蒸馏水，温浸提取三次，每次6～8 h，每次提取完成之后，用8层厚脱脂棉纱布进行减压抽虑，三次提取所得滤液合并，并进行浓缩；

（3）将步骤（2）中所得浓缩液进行醇沉；

（4）将醇沉后所得的浓缩液在4℃条件下静置12 h，然后在4000～5000 r/min的条件下离心10～20 min，取上清液，弃沉淀；

（5）将步骤（4）中的上清液用大孔吸附树脂柱进行纯化，纯化时先用蒸馏水进行洗脱，再用低浓度乙醇进行洗脱，并收集该部分洗脱液；