[发明专利]miR-216在制备促进成骨分化的药物中的用途

说明书

技术领域

本领域涉及再生医学领域，具体而言涉及miRNA在制备促进成骨分化的药物中的用途。

背景技术

人间充质干细胞（hMSC_s）具有自我更新和多谱系分化潜能，在适当条件下能够分化为骨、软骨、脂肪和肌组织（Prockop,DJ，1997；Phinney,DG，2007；Pittenger,MF等人，1999和Fink,T等人，2011）。研究者首先从骨髓中分离出MSC（BMSC_s），并证明了其多系分化的能力。BMSC_s向成骨细胞分化是机体普遍存在的生理过程。在生理条件下，骨组织呈现成骨细胞的骨形成和破骨细胞的骨吸收的动态平衡。一旦各种原因导致这种动态平衡破坏，如成骨分化能力降低时，就会引起骨质疏松、锁骨颅骨发育不全、股骨头坏死、关节退行性变、脊柱侧弯等骨相关疾病。因此，揭示间充质干细胞成骨的调控机制具有极其重要的临床应用价值。

由于受来源的限制以及取样困难，BMSC的研究和应用发展较慢。后来的研究发现，除骨髓外，MSC还广泛存在于脂肪、皮肤、滑液、脱落的牙齿、羊水和胎盘等多种组织器官中（Prockop,DJ，1997）。研究证明，与骨髓来源的MSC相似，人脂肪组织来源的MSC（hAMSC_s）具有跨系甚至跨胚层的多向分化潜能，在体内外可分化成多种细胞类型，如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞、内皮细胞、神经胶质细胞等。此外与BMSC相比，hAMSC_s具有原料充足，取材方便，体外分离扩增方法简单易行等优点，因此备受研究者青睐。目前hAMSC_s已经成为研究MSC自我更新和分化的最佳细胞模型和最有发展潜力的组织工程种子细胞。

MicroRNA_s（miRNA_s）是一类高度保守的非编码小RNA分子，能够在转录或转录后水平调控靶基因表达（Ambros,V，2004；Bartel,DP，2004）。最近，越来越多的证据表明miRNA_s能够调控细胞分化和命运决定（Ivey,KN and D Srivastava，2010）。目前，miR-125、miR-133、miR-135、miR-138、miR-181、miR-206、miR-9、miR-27、miR-196a、miR-214、miR-764-5p、miR-2861、miR-3960、miR-642a-3p、miR-141/200a和miR-17-5p～92/miR-106a等许多miRNA_s已经被证实参与成骨分化的调控。miR-214转基因小鼠表现出明显的成骨能力降低（Wang,X，2013）。这些研究结果提示，miRNA_s在MSC的成骨分化调控中可能扮演了非常重要的角色。

发明内容

根据一些具体实施方式，本发明提供miR-216在制备促进成骨分化的药物中的用途。

在一些具体实施方式中，miR-216促进人脂肪组织来源的间充质干细胞向成骨分化。

在一些具体实施方式中，miR-216的序列如SEQ ID No.1所示。SEQ ID No.1为UAAUCUCAGCUGGCAACUGUGA，其登录号为miRbase Accession number MIMAT0000273。

在一些具体实施方式中，通过转染试剂提供miR-216；转染试剂优选为脂质体。在一些具体实施方式中，转染试剂是Lipofectamine2000。

在一些具体实施方式中，miR-216的转染浓度为100nmol/L。

附图说明

图1：hAMSC_s经成骨诱导培养基诱导后3天的ALP染色。

图2：hAMSC_s经成骨诱导培养基诱导后12天的茜素红染色。

图3A：转染NC对照后，hAMSC_s的ALP染色。

图3B：转染miR-216a后，hAMSC_s的ALP染色。

图4A：转染NC对照后，hAMSC_s的茜素红染色。

图4B：转染miR-216a后，hAMSC_s的茜素红染色。